希特林蛋白缺乏症实时荧光PCR解链曲线快速基因分型的建立与应用
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国家自然科学基金面上项目(81972008);广东省医学科学技术研究基金(A2018489)。


Development and application of a rapid genotyping method for Citrin deficiency by real-time fluorescence PCR melting curve technique
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    摘要:

    摘要:目的?建立一种基于实时荧光PCR解链曲线技术的希特林蛋白缺乏症基因的快速分型方法。方法?以SLC25A13基因c.851-854delGTAT、c.1638-1660dup23、IVS6+5G>A等常见突变为靶点,设计特异性引物及探针,建立基于实时荧光PCR解链曲线分析的希特林蛋白缺乏症快速基因分型方法;盲法编号后用所建立的方法检测40例已知基因型血斑标本,评价其敏感性与特异性。结果?各目标位点的野生型和突变型均有其特异性解链Tm值,解链曲线结果图直观且易于判读;40例标本的检测结果与靶基因型结果相符,即敏感性和特异性均为100%。结论?建立了一种希特林蛋白缺乏症靶基因位点快速基因分型方法,简单实用,准确稳定,可作为当前希特林蛋白缺乏症SLC25A13基因常规分子诊断及人群分子筛查的适用方法。

    Abstract:

    Abstract:?Objective?To establish a genotyping method for Citrin deficiency based on real-time fluorescence PCR melting curve technique.Methods?Specific primers and probes for the common mutations of?SLC25A13?gene, c.851-854delGTAT, c.1638-1660dup23 and IVS6+5G>A, were designed, and then a rapid genotyping method for Citrin deficiency was developed based on fluorescence PCR melting curve technique.The sensitivity and specificity of this method were also evaluated by the detection of 40 genotype-known blood spot samples.Results?For the specific melting Tm values of mutant and wild type of each target site, the melting curves were intuitive and easy to interpretation.The results of the 40 blind samples were consistent with the target genotypes.The sensitivity and specificity were 100%.Conclusion?A rapid genotyping method for Citrin deficiency was established.It is simple, practical, accurate and stable, so it could be used for routine molecular diagnosis of Citrin deficiency and molecular screening?SLC25A13?gene in population.

    参考文献
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    引证文献
引用本文

刘海平,秦佳纯,袁伟曦,黄伟伦,周万军.希特林蛋白缺乏症实时荧光PCR解链曲线快速基因分型的建立与应用[J].临床检验杂志,2021,39(1):22-25

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  • 收稿日期:2020-10-27
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  • 在线发布日期: 2021-03-19
  • 出版日期: 2021-01-28
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