摘要:摘要:目的：用液态芯片技术研究类风湿关节炎(RA)患者血清免疫复合物(IC)对关节成纤维样滑膜细胞(FLS)分泌细胞因子的影响。 方法：用聚乙二醇（PEG）沉淀法分别提取10份抗环瓜氨酸肽抗体（ACCP）阳性的RA患者及健康人对照血清IC，间接ELISA法测定IC中ACCP特异性IC水平。体外培养RA患者关节FLS，分别用RA患者ACCP-IC阳性IC(ACCP⁺-IC)、ACCP-IC阴性IC(ACCP^--IC)及健康人对照血清IC(C-IC)刺激FLS，培养24 h后，用液态芯片技术检测不同来源IC刺激对FLS分泌IL-1β、IL-2、IL-6、IL-8、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、GM-CSF、EGF、VEGF等11种细胞因子水平的影响。 结果:10份RA患者血清中提取的IC，包括ACCP⁺-IC 6份和ACCP^--IC 4份，刺激FLS 24 h后，可诱导细胞分泌大量IL-6、IL-8和GM-CSF；其中ACCP⁺-IC组刺激FLS分泌GM-CSF和IL-8水平均显著高于ACCP^--IC组。3组刺激物组刺激分泌IL-1β、IL-2、IL-10、IL-15、IL-17、TNF-α、EGF、VEGF等其他8种细胞因子含量均无显著性差异。 结论:ACCP⁺-IC具备更强的促FLS分泌GM-CSF、IL-6和IL-8的活性。

摘要:摘要：目的:探讨氨甲喋呤（MTX）对映体诱导的耐药A549细胞株中磷酸化酪氨酸激酶受体(RTKs)的表达差异及受体间的相关性。 方法:用MTX对映体浓度递增结合低剂量持续诱导肺腺癌A549细胞株，用Luminex液相芯片技术检测L-(+)-MTX/A549细胞、D-(-)-MTX/A549细胞和亲本A549细胞3组细胞中7种磷酸化RTKs［磷酸化表皮生长因子受体(p-EGFR)、磷酸化胰岛素样生长因子1受体(p-IGF-1R)、磷酸化肝细胞生长因子受体(p-HGFR）、磷酸化血小板源性生长因子受体（p-PDGFRβ）、磷酸化人类表皮生长因子受体2(p-HER-2)、磷酸化血管内皮生长因子受体2(p-VEGFR2)、磷酸化血管生成素受体(p-Tie-2)］的表达水平，分析它们之间的相关性。 结果:D-(-)-MTX/A549组p-EGFR、p-HER-2的平均荧光强度(MFI)分别为26.91±1.81、16.56±1.15；L-(+)-MTX/A549组的MFI分别为54.13±2.75、16.94±1.44；亲本细胞组的MFI分别为54.38±2.88、33.75±2.49。p-EGFR与p-HER-2显著相关(P<0.05)，p-HER-2和p-VEGFR、p-HGFR之间显著相关(P<0.05)，其他磷酸化RTKs之间相关关系不显著。 结论:MTX对映体诱导的耐药A549细胞株中，p-EGFR表达水平存在手性差异。

摘要:摘要：目的：建立稳定、快速和特异的抗MHC-I类链相关基因B（MICB）抗体流式荧光检测方法，了解MICB抗体在健康人群中的分布频率。 方法：克隆、表达和分离纯化MICB融合蛋白，将其包被在Luminex微球表面，建立MICB抗体流式荧光检测方法。评价方法的线性范围、特异性、精密度、准确性，并用此方法检测500例健康人血清MICB抗体。 结果：MICB抗体流式荧光检测方法在血清抗体浓度在3.1~100.0 μg/mL之间，具有较好的线性关系，相关系数为0.995。回收实验和重复实验结果显示，其回收率为97.4%~99.6%，批内变异系数为3.4%、2.9%，批间变异系数为4.5%、4.9%。该检测方法与MICA抗体无交叉反应。500例健康人血清中发现4例MICB等位基因特异性抗体。 结论：MICB抗体流式荧光检测方法的特异性和灵敏度较高，结果稳定可靠。MICB抗体在器官移植中的作用需进一步研究。

摘要:摘要：目的：了解义乌妇女的人乳头瘤病毒(HPV)感染及分型情况。 方法：收集4 178例HPV体检妇女宫颈脱落细胞标本，用流式荧光杂交法（液相芯片技术）检测HPV基因型7种低危型、19种高危型。 结果：4 178例妇女中有765例阳性，总检出率为18.31%，其中单一基因型检出率为15.53%，二重感染率为2.28%，三重感染率为0.31%，四重感染率为0.19%。HPV亚型共检测出21种，分别是6、11、40、61、16、18、26、31、33、38、39、45、51、52、53、56、58、59、68、82、83型；常见的基因型分别为6、11、16、18、33、52、58等亚型。18~30岁组感染较集中的有6、11、16、33、52、58等基因型，31~40岁组较集中的有16、18、39、52、58等，41~50岁组较集中的有16、18、33、52、58等；低危型感染在18~30岁组检出率相对较高，16、52、58型在18~50岁组阳性率均较高；18型在31~40、41~50岁2组阳性率较高，与18~30岁组比较，P均＜0.05。HPV 18、11、6型在本地与外地人口的感染率存在显著差异，P<0.01，HPV 18型本地人口高，而HPV 11、6型外地人口高。 结论：义乌妇女的HPV感染受经商流动人口的影响，基因型分布较广。

摘要:摘要：目的：用随机扩增多态性DNA（RAPD）分析、以基因外重复回文序列（REP）及肠杆菌基因间重复一致序列（ERIC）为模板的重复序列聚合酶链反应3种基因分型方法对产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）大肠埃希菌进行同源性分析，筛选各级医疗机构易于开展的基因分型方法。 方法：从住院患者痰液、尿液、血液等标本中鉴定并筛选产ESBLs大肠埃希菌。以RAPD、ERIC、REP为引物进行扩增的方法,对产ESBLs大肠埃希菌的DNA进行PCR扩增并进行同源性分析。用SPSS 16.0软件进行聚类分析，比较其分辨率系数。 结果：共筛选出产ESBLs大肠埃希菌25株，3种方法均可将大肠埃希菌扩增出丰富的区带，产ESBLs大肠埃希菌分别被分为15、18、20个基因型，分辨率系数分别为0.957、0.970、0.977。 结论：在产ESBLs大肠埃希菌基因同源性分析中，RAPD、ERIC-PCR和REP-PCR 3种方法的分辨力均很好，尤以REP-PCR分辨率最高。

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摘要:摘要:目的:评价LC Green、Syto 9和Eva Green 3种高分辨熔解（HRM）染料对单核苷酸多态性（SNP）基因分型的能力。 方法:以肿瘤坏死因子（TNF）基因启动子-857 C>T（rs1799724）位点为例，分别用上述3种荧光染料进行PCR-HRM检测，依据特征熔解曲线进行基因分型并测序验证。基因分型能力评价以野生型与纯合突变型PCR产物Tm值之差（△Tm）来表示。 结果:PCR-HRM检测到4种特征熔解曲线，经测序后发现第4条为双突变杂合，包含863C>A（rs1800630）位点。HRM染料LC Green, Syto 9, EVa Green的基因分型能力分别为(0.52±0.030) ℃、(0.51±0.066) ℃和(0.39±0.152) ℃。其中Syto 9野生型(CC)和突变型（TT）的变异系数（CV）均为0.03%,为3种染料中最低。 结论:3种染料均能用于HRM技术进行SNP基因分型，Syto 9和LC Green分辨率优于Eva Green，其中Syto 9易用性最好、Eva Green性价比最高。

摘要:摘要:目的：探讨荧光原位杂交技术（FISH）结合常规细胞遗传学（CC）方法检测多发性骨髓瘤（MM）患者染色体异常情况的意义。 方法：用CC法和FISH对26例MM患者进行染色体异常分析。 结果：26例MM患者中，CC法检测出染色体异常有9例（34.6%）；FISH检测出染色体异常有22例（84.6%），其中IGH基因重排占38.5%(10例)；P53缺失5例（19.2%）；1q21扩增9例，缺失1例；13q14缺失13例（50.0%）。13例伴有13q14缺失MM患者中8例出现1q21异常，13例未检测到13q14缺失患者中2例发现1q21异常，差异有统计学意义(χ²=5.85，P<0.05)。MM患者13q14缺失和1q21异常之间存在正相关关系（r=0.474，P＜0.05）。 结论:FISH结合CC法可提高MM患者染色体异常的检出率。

摘要:摘要：目的:评价离心培养法分离检测流感病毒的敏感性、特异性，探讨其临床应用价值。 方法:收集2010年1月至2011年2月895份上呼吸道感染患者鼻咽拭子，以传统细胞培养法和离心培养法进行流感病毒培养，并作免疫荧光试验（IF）鉴定。 结果：广州地区上呼吸道感染患者的流感病毒感染呈两个高峰期，分别为3～5月的春季高峰（以乙型流感病毒为主）和7～9月夏季高峰（甲型流感病毒为主）；传统细胞培养分离流感病毒288例，分离率为32%；离心培养分离病毒260例，分离率、敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值分别为29%、89%、99%、98%、95%。 结论：离心培养法结合IF具有高的敏感性和特异性并能快速报告结果，而且操作简单、节省人力，可实现流感病毒快速分离，适于临床实验室使用。

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摘要:摘要：目的：探讨宫颈癌患者新辅助化疗前后血清胸苷激酶1（S-TK1）水平的变化在预测新辅助化疗疗效中的意义。 方法：选择69例经宫颈活检证实为宫颈癌患者，行新辅助化疗2个疗程，用免疫增强化学发光点印记法（ECL dot-blot）检测化疗前后的S-TK1含量，同时检测42例体检健康者S-TK1水平。 结果：宫颈癌患者S-TK1水平为（8.63±2.36） pmol/L，显著高于健康对照组的（0.52±0.42） pmol/L（P＜0.05）；宫颈癌患者新辅助化疗后的S-TK1水平为（3.63±2.76） pmol/L，明显低于化疗前的（8.63±2.36） pmol/L，差异有统计学意义（P＜0.05）；临床缓解组的S-TK1含量降低的百分比显著高于临床无效组（P＜0.05）。 结论：S-TK1检测可以作为评估宫颈癌新辅助化疗疗效的指标之一。

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摘要:摘要：目的：鉴定人骨髓间充质干细胞（human bone marrow-derived mesenchymal stem cell，HMSC）在肿瘤微环境下分化为肿瘤相关成纤维细胞（tumor associated fibroblast，TAF）及对肿瘤生长作用的观察。 方法：用Transwell实验鉴定HMSC向人胃腺癌细胞株（SGC-7901）迁移的能力。对与人胃癌组织或SGC-7901培养上清液（TCM）长期共培养后的HMSC细胞，用免疫荧光染色检测肌动蛋白微丝(F-actin)的表达、免疫细胞化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin，α-SMA）及波形蛋白（vimentin）的表达。用实时定量PCR法检测与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞中α-SMA表达水平。分别以SGC-7901细胞、SGC-7901细胞＋HMSC细胞、胃癌组织与HMSC共培养细胞＋SGC-7901细胞、TCM与HMSC共培养细胞＋SGC-7901细胞接种裸鼠，构建裸鼠致瘤模型，测定4组模型致瘤时间及瘤体大小。 结果：Transwell实验结果表明HMSC在肿瘤微环境诱导下具有向肿瘤迁移的能力，诱导后的HMSC细胞高表达TAF细胞表面特征蛋白F-actin、α-SMA及vimentin，实时定量PCR结果表明与胃癌组织及TCM共培养后的HMSC细胞α-SMA mRNA表达水平分别为(0.58±0.05)和(0.52±0.06)，与对照组(0.35±0.04)相比明显增高（F=4.72，F=5.31，P均<0.05）。 裸鼠致瘤模型显示经肿瘤微环境诱导后的TAF可促进体内肿瘤生长。 结论：肿瘤微环境诱导下HMSC活化并可分化为TAF，并对肿瘤生长起到促进作用。

摘要:摘要：目的：探讨高胆固醇血症患者低密度脂蛋白受体基因（LDL-R）第2外显子Xsp-I位点多态性与血清IL-6的关系及意义。 方法：用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术结合DNA测序检测730例高胆固醇血症患者和200例体检健康者LDL-R基因的Xsp-I酶切位点多态性；按基因型分组，用ELISA法检测各基因型IL-6的浓度，对两者关系进行分析。用多元逐步回归分析影响IL-6水平的因素。 结果：与健康对照组相比，高胆固醇血症组血清IL-6明显升高，HDL-C降低（P均<0.05）；基因型分别为X^-X^-、X⁺X^-、X⁺X⁺基因型的高胆固醇血症患者，TC、LDL-C、IL-6水平依次升高，HDL-C水平依次降低，差异有统计学意义（P均<0.05）；多元线性回归分析显示基因型和胆固醇水平是影响IL-6水平的独立因素。 结论：高胆固醇血症患者血清IL-6水平升高，LDL-R基因X⁺X⁺基因型可能通过影响IL-6水平促进高胆固醇血症。

摘要:摘要：目的：克隆烟曲霉硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase，TR）基因并构建原核表达载体，获得烟曲霉TR重组蛋白，并鉴定其抗原性。 方法：用RT-PCR方法从烟曲霉总RNA中扩增出TR cDNA片段，克隆至pMD18-T载体，并转化E.coli JM109。经序列分析证实后，提取重组克隆质粒双酶切获得目的基因，与表达载体pET28a(+)连接，转化E.coli BL21（DE3），筛选重组表达质粒。用异丙基硫代β-D-半乳糖苷（IPTG）诱导重组融合蛋白表达，用SDS-PAGE及免疫印迹法分析重组蛋白质，并用亲和层析柱进行纯化。 结果：构建了含TR全长基因的重组表达质粒，IPTG诱导后可高效表达。免疫印迹结果表明该重组蛋白质可被侵袭性曲霉病患者血清识别。 结论：成功构建了重组表达质粒pET28a(+)/TR，并在大肠埃希菌中获得了高效表达，重组蛋白质具有良好的抗原性，为进一步研究奠定了基础。

摘要:摘要:目的：探讨实时定量PCR方法和高分辨率熔解曲线法（HRM）在检测JAK2基因V617F突变中的应用。 方法：以JAK2基因V617F发生纯合突变的人红白血病细胞株（HEL）及不含JAK2基因V617F突变的人白血病细胞株（HL60）为阳性对照和阴性对照，优化HRM法检测条件，分别以优化的HRM法和直接测序法对63例临床疑似骨髓增殖性肿瘤（MPN）患者DNA标本进行JAK2基因V617F突变检测，评价2种检测方法结果的一致性。 结果：HRM法可检出系列混合样本中5%的突变型等位基因突变,且重复性较高。以测序法为金标准，HRM法的敏感性和特异性均为100％，两种方法结果一致。 结论：HRM法能够在单一闭管体系中实现对JAK2基因V617F突变的检测，具有较高的敏感性和特异性，可用于JAK2基因V617F突变的临床检测。

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摘要:摘要：目的：建立一种ELISA方法用于定量分析血清抗甲状腺过氧化物酶（TPO）抗体（TPOAb）。 方法：用生物素化牛血清清蛋白（BSA）和链霉亲合素包被微孔板，同时加入生物素化TPO抗原和待检血清，再加入酶标记抗人IgG，建立间接包被模式酶联免疫法测定抗TPO抗体。经方阵滴定确定生物素化抗原和酶标抗体的最适浓度，优化反应条件，并进行方法学评价。 结果：本法抗原包被量为0.083 μg/mL，检测灵敏度为0.165 IU/mL；高、低浓度混合血清批间变异系数（CV）为9.2%、9.0%，批内CV为4.6%、5.6%；回收率为96.0%~104.0%;包被板37 ℃放置5 d保持稳定；与抗甲状腺球蛋白抗体（TGAb）交叉反应率为0.22%。经检测120例健康人，将参考值定为<65.7 IU/mL。与Abbott公司试剂盒检测结果的相关系数（r）为0.985（P<0.01）。 结论：间接包被模式适合TPOAb测定，包被抗原用量少,方法灵敏度高，特异性强；操作简单，成本较低，适合基层医院。

摘要:摘要：目的：检测Slug基因在宫颈癌和慢性宫颈炎症组织中的表达，探讨其与宫颈癌发生、发展的相关性及在宫颈癌诊疗中的意义。 方法：收集31例宫颈癌组织和17例慢性宫颈炎症组织标本，用RT-PCR、实时定量PCR检测Slug mRNA的表达；用western blot分析Slug蛋白的表达水平，并分析Slug mRNA在宫颈癌中的表达水平与临床病理因素及高危型HPV病毒载量的相关性。 结果：宫颈癌组织中SlugmRNA表达阳性率及相对表达水平均显著高于慢性宫颈炎症组织（χ²=9.872；U=140，P均<0.01）；western blot也证实Slug蛋白表达水平高于慢性宫颈炎症组织（U=98,P<0.01）。在宫颈癌组织中，Slug的阳性表达与国际妇产科学联盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics, FIGO）肿瘤分期相关，Ⅱ期阳性率高于Ⅰ期（χ²=4.037，P<0.05），与年龄、肿瘤大小、分化程度、淋巴细胞转移和病理类型无关；而Slug基因相对表达水平与高危型HPV病毒载量呈正相关（r=0.554,P<0.01）。 结论:宫颈癌组织中Slug的表达上调，且与宫颈癌的FIGO分期相关，在宫颈癌的发生机制中，可能存在Slug和高危型HPV的协同作用。

摘要:摘要：目的：探讨结直肠癌患者血浆中骨形态发生蛋白7（BMP7）的水平及临床意义。 方法：收集56例结直肠癌患者术前血浆标本，以60例体检健康者作健康对照，ELISA法测定血浆中BMP7水平。 结果：56例结直肠癌患者中，35例术前血浆BMP7平均含量为115.2 pg/mL，升高率为62.5%；60例健康对照者血浆中未检测到BMP7升高率异常。两组间血浆BMP7升高率有显著性差异(χ²=37.5，P<0.01)。检出BMP7异常的35例结直肠癌患者，有14例同时进行了血浆CEA检测，其中6例(42.9%)高于正常参考值。而在21例BMP7正常的结直肠癌患者中，7例标本CEA检测均在正常值范围。 结论:BMP7在结直肠癌患者血浆中有较高的表达水平，其升高率明显高于CEA，敏感性为62.5，特异性为100%，可作为结直肠癌诊断的辅助指标。

摘要:摘要：目的：分析我室2008及2009年参加国际临床化学联合会(IFCC)的参考实验室GGT、CK、LDH的国际比对计划的结果，评估我室所用参考方法的检测质量及完善程度。 方法：用IFCC推荐的酶学活性测定（37 ℃）参考方法测定人血清GGT、CK、LDH，用酶有证参考物质评估参考方法的准确度，同时测定国际RELA比对样本，并对回报数据进行分析处理。 结果：2008年度的国际RELA比对结果室内变异系数(CV) 在0.67%~1.13%之间，与均值的偏倚在±3.50%以内；2009年度的国际RELA比对结果室内CV均在0.88%~1.30%之间，GGT和CK测定结果的偏倚在±1.00%以内，但LDH测定结果的偏倚大于2008年。2008、2009年的GGT、CK、LDH的比对结果均在IFCC公布的等效限内。 结论：本参考实验室所用的GGT、CK、LDH的检测方法比较成熟稳定。

摘要:摘要：目的：探讨武汉地区结核分枝杆菌（MTB）利福平耐药株rpoB基因的突变特征。 方法：对76例MTB临床分离株包括rpoB核心区域81 bp碱基在内的428 bp碱基进行PCR测定，并进行DNA序列分析。 结果：76例临床分离MTB中利福平耐药株56例，敏感株20例。耐药株中92.9%（52/56）存在突变，共涉及10个密码子的18种突变类型。 531、526为常见突变位点，其突变率分别为57.7%(30/52)、19.2%(10/52)；联合突变率为13.5%（7/52）；同时发现了509位（AGC→AGA）新的突变类型和国内少见的517位CAG缺失类型。 结论：rpoB基因突变在武汉地区利福平耐药MTB中广泛存在，并存在新的突变位点。

摘要:摘要：目的：用改良Hodge试验检测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌，初步推测产碳青霉烯酶肠杆菌科细菌的流行情况。 方法：筛选出2009年4月~2010年4月对碳青霉烯类抗生素耐药以及敏感性下降或者碳青霉烯类抗生素敏感而一种以上三代头孢菌素耐药的肠杆菌科细菌23株，用改良Hodge试验检测其碳青霉烯酶。 结果：23株菌中21株（91.3%）呈多重耐药，其中5株菌改良Hodge试验阳性，分别为肺炎克雷伯菌1株、弗劳地枸橼酸杆菌1株、大肠埃希菌1株和霍氏肠杆菌2株。 结论：改良Hodge试验阳性提示所测菌株中有产碳青霉烯酶的肠杆菌科细菌的存在，因此要加强对此类细菌的院内感染管理监测。

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摘要:摘要：目的：探讨Lymph-X和Lymph-Y在筛查IM、ALL中的应用价值。 方法：研究对象为1 500例健康体检者，110例IM、ALL、CLL及其他原因致外周血淋巴细胞升高患者。用Sysmex XE-2100血液分析仪检测血常规，统计Lymph-X和Lymph-Y参数并分析。 结果：健康体检者Lymph-X和Lymph-Y值与患者年龄、性别及淋巴细胞计数无相关性，参考区间分别为765.3~809.8、624.4~731.4。IM组的Lymph-X和Lymph-Y值分别为871.6±49.3和810.1±153.7，ALL组分别为885.8±70.4和884.9±244.4，明显高于对照组、CLL组以及淋巴细胞升高的其他疾病组（P<0.05）。当Lymph-X为839，Lymph-Y为755时，诊断IM的敏感性为94.4%，特异性为75.0%；当Lymph-X为836，Lymph-Y为792时，诊断ALL的敏感性为93.4%，特异性为75.2%。 结论：参数Lymph-X和Lymph-Y可用于IM、ALL的筛查。

摘要:摘要：目的：评价酶联免疫反应加速仪用于ELISA检测CEA、CA242的方法。 方法：采用NY/MMJ ELISA加速仪改进法与常规ELISA法分别检测临床血清标本，评价加速仪改进法的精密度以及两法的相关性和一致性。 结果：加速仪改进法检测CEA和CA242的批内、批间变异系数（CV）均＜8%，批间CV明显优于常规ELISA。改进法与常规法检测CEA、CA242结果的总符合率分别为99.3%和98.6%，Kappa值分别为0.985和0.934。 结论：加速仪具有加速反应的作用，不影响检测结果，可应用于ELISA方法的改进。

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