摘要:摘要：目的：建立一种检测产志贺毒素大肠埃希菌(STEC)的双重实时荧光定量PCR法。 方法：根据stx1和stx2及其变种序列，设计PCR引物和TaqMan探针，建立双重实时荧光定量PCR检测体系，进行灵敏度和特异性评价，并对STEC模拟粪便标本及动物粪便标本进行检测分析。 结果：双重实时荧光定量PCR检测含志贺毒素基因重组质粒的灵敏度为1×10² copies/反应体系；该法对17种常见肠道病原菌均无特异性扩增，对47株不同志贺毒素类型及变种的已知STEC菌株的检测特异性为100%；对模拟粪便标本的检测下限为3.55×10³ CFU/g；对动物粪便标本的检测阳性率高于细菌分离培养。 结论: 建立的双重实时荧光定量PCR可作为不同志贺毒素类型及变种的STEC菌株的快速鉴定方法，亦可用于人感染性腹泻标本和动物粪便标本STEC感染的快速筛查。

摘要:摘要：目的：探讨显微镜观察药物敏感性试验（MODS）用于结核性淋巴结炎的诊断价值及直接进行结核分枝杆菌（MTB）耐药性检测的可能性。 方法：对94例细针针吸细胞学（FNAC）诊断为结核性淋巴结炎患者，用MODS法、抗酸染色和改良罗氏培养基培养（以下简称罗氏法）对穿刺吸出物进行MTB检测；抗酸染色阳性标本同时用MODS法和绝对浓度法检测药敏，对两法检测结果不符的菌株进行最低抑菌浓度（MIC）测定。 结果：MODS法、罗氏法和抗酸染色法检测结核性淋巴结炎的阳性率分别为51.1%、39.4%和22.3%，MODS法阳性率均显著高于罗氏法和抗酸染色法（χ² =7.69与25.04，P均＜0.01）。MODS法和罗氏法检测结果的符合率为86.2%。MODS检测时间中位数为13 d，明显短于罗氏培养法的29 d。MODS检测21株MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇和链霉素药敏结果与罗氏药敏结果符合率分别为95.0%、85.7%、85.7%、100%。7个MODS药敏结果与罗氏药敏检测结果不符，经MIC检测5个药敏结果支持MODS法结果。 结论：MODS技术对结核性淋巴结炎诊断和MTB药敏试验检测有较高的敏感性和准确性，在结核病防控中有较好的应用价值。

摘要:摘要：目的：建立一套同步检测结核分枝杆菌(MTB)常见耐药突变基因的等位基因特异性PCR（AS-PCR）检测体系，以间接判断对利福平（RFP）与异烟肼（INH）的耐药性。 方法：用AS-PCR技术同步检测58株MTB临床分离株rpoB基因516位、526位和531位，katG基因315位及inhA基因-15位密码子突变，并与DNA测序结果进行比对。 结果：AS-PCR法对RFP耐药株检出率为95.1%（39/41），其中rpoB基因531位、526位、516位点突变分别检出28株、10株、2株，包括531位与526位联合点突变1株；未检出突变的2株RFP耐药株经测序验证1株未发生突变、1株发生533位点突变；RFP敏感株均未检测到突变。AS-PCR法对INH耐药株检出率为86.5%（45/52），其中katG基因315位点突变43株、inhA基因-15位点突变2株，未检出突变的7株INH耐药株经测序验证未见突变；INH敏感株均未检测到突变。 结论：等位基因特异性PCR能够快速检测MTB常见突变基因，具有较高的敏感性与特异性，快速经济、操作简便。

摘要:摘要：目的：建立一种不提取核酸的孕妇血浆中胎儿游离DNA的检测方法。 方法：构建不提取核酸PCR法，用巢式PCR扩增Y染色体上的SRY基因序列和X染色体上的FMR1基因序列，检测44例孕妇血浆中游离DNA。根据随访判断结果的准确性。 结果：44例孕妇经随访确认24例有男性胎儿，20例有女性胎儿。24例孕男性胎儿的孕妇血浆标本中有21例扩增出SRY基因和FMR1基因，敏感性为87.5%（21/24)；20例孕女性胎儿的孕妇血浆标本中有17例扩增出FMR1基因，敏感性为85.0%（17/20)。 结论：建立的不提取核酸PCR法具有快速、简便等优点，可用于性连锁遗传病的产前诊断。

摘要:摘要:目的：探讨甘露糖结合凝集素(MBL)基因外显子上的52、54、57密码子以及其启动子区域 550位点多态性与妊娠糖尿病(GDM)发病的关系。 方法：选取GDM患者、正常妊娠对照各75例，检测血糖、血压、血清MBL水平，并用基因测序法检测并分析MBL基因外显子上的52、54、57密码子以及启动子区域 550位点的序列特征。 结果：GDM组和正常妊娠对照组MBL基因外显子上的54位密码子和启动子区550位点存在多态性，并且其对应的等位基因频率存在统计学差异（χ²分别为5.811和6.475，P<0.05），Logistic回归分析显示其突变型为GDM的危险因素。正常妊娠对照组血清MBL水平高于GDM组（t=3.10，P<0.05）。54位密码子位点的野生型、杂合型、纯合突变型血清MBL水平差异有统计学意义（F=81.939，P<0.05）。 结论: MBL基因外显子上的54密码子及启动子区 550位点多态性位点与南京地区汉族GDM有关。

摘要:摘要：目的：分析一家系中2例黏多糖贮积症Ⅰ型（MPSⅠ）患儿α-L-艾杜糖醛酸酶（IDUA）基因突变。 方法：用PCR结合直接测序技术分析患儿IDUA基因14个外显子及侧翼序列的突变，对107例健康人行限制性酶切分析以排除新发现的突变为多态变异。 结果：2例患儿均携带IDUA基因复合杂合突变p.M1T/p.T179R，其父母分别为p.M1T突变和p.T179R突变的携带者。107例健康人未见p.T179R突变。 结论：p.M1T/p.T179R突变可能是该家系2例患儿的致病原因。

摘要:摘要：目的：研制一种无转化能力的肺炎链球菌（S.pn）减毒株R6ΔcomE，评价其作为S.pn活菌疫苗的保护效果。 方法：构建comE基因缺陷的R6ΔcomE株，评价R6、R6ΔcomE株的转化能力及其毒力；用R6、R6ΔcomE株分别对BALB/c小鼠进行黏膜免疫，用ELISA法检测免疫小鼠血清特异性抗体效价和脾细胞上清中IFN-γ、IL-4及IL-17A水平；用D39株经鼻腔黏膜感染免疫小鼠，观察生存时间和生存率。 结果：成功构建comE缺陷的R6ΔcomE株。体外转化实验中R6株转化菌量中位数为1 970 CFU/mL，体内转化实验中每只小鼠34 CFU，体内外实验中R6ΔcomE株转化菌量均为0；感染1×10⁸ CFU D39株的小鼠于3 d内全部死亡，而感染相同剂量R6、R6ΔcomE株的小鼠均存活＞21 d，且均于感染后72 h内清除细菌。R6、R6ΔcomE株黏膜免疫小鼠后，血清抗体滴度的中位数（P₂₅，P₇₅）分别达1.0×10⁶（6.4×10⁵，1.8×10⁶）、1.2×10⁶（8.1×10⁵, 1.6×10⁶），与相应阴性对照组比较差异有统计学意义（P均＜0.01）；与相应阴性对照组比较，R6、R6ΔcomE株免疫组IL-4、IL-17A均升高（P均＜0.01），而IFN-γ水平差异无统计学意义（P＞0.05）。黏膜免疫R6、R6ΔcomE株的BALB/c小鼠可抵抗D39株感染，生存率分别为60%和70%。 结论: R6ΔcomE株毒力弱，无转化能力，可诱导对S.pn感染的免疫保护，是一株安全有潜力的S.pn减毒活菌疫苗。

摘要:摘要：目的：构建经原核表达和纯化的HA-2FKBP-ABD（HF-2A）融合蛋白，探讨HF-2A对BCR-ABL的靶向作用。 方法：用PCR扩增HF-2A片段，将HF-2A克隆入pET32a（+）原核表达载体，IPTG诱导表达，镍离子亲和层析柱纯化HF-2A蛋白，SDS-PAGE分析诱导和纯化的条件，western blot鉴定HF-2A蛋白的表达，pull down实验检测HF-2A与BCR-ABL的相互作用。 结果：重组原核表达载体经PCR、双酶切及测序鉴定证明构建正确；0.1 mmol/L IPTG 25 ℃诱导4 h获得HF-2A蛋白的高表达，其分子量（Mr)约为74 000，纯化后可获得高纯度的HF-2A蛋白；HF-2A与BCR-ABL能相互作用。 结论：成功表达并纯化了HF-2A融合蛋白，HF-2A能够靶向作用BCR-ABL。

摘要:摘要：目的：研究杭州地区2009年至2012年甲型H1N1流感病毒血凝素（HA）与神经氨酸酶（NA）的基因进化特征,分析该病毒的遗传变异和抗原的分子水平转变。 方法：用RT-PCR分别扩增甲型H1N1流感病毒HA基因和NA基因片段并进行测序，用DNAMAN和MEGA 4.0生物信息学软件对HA和NA基因序列进行进化分析。 结果：建立的RT-PCR可成功检测HA(C)、HA(D)和NA基因，遗传进化分析结果表明，杭州地区甲型H1N1流感病毒的HA与NA氨基酸序列的亲缘系数与WHO推荐的病毒株及国内代表株的同源性均为98.9%~100%；三维构象结果表明，HA编码的蛋白质有5个位点发生改变，而NA编码的蛋白质仅发生2个位点改变。 结论：2009年至2011年杭州地区甲型H1N1流感病毒HA和NA基因序列与世界范围内流行的病毒参考株具有高度同源性，但HA与NA蛋白质表位存在某些氨基酸位点的改变。

摘要:摘要:目的：建立人胚胎干细胞（hESCs）向间充质干细胞（MSCs）分化方法，并初步鉴定hESCs来源的MSCs（hESC-MSCs）。 方法：用拟胚体法将hESCs分化为MSCs，对其形态进行观察；用流式细胞术检测细胞表面标志；测定细胞化学染色特性。 结果：hESC MSCs形态与人骨髓间充质干细胞（hBM-MSCs）相似；流式细胞分析显示hESC-MSCs表达CD29、CD44、CD13，但不表达CD14、CD133、CD34、CD45、HLA-DR；细胞化学染色显示，hESC-MSCs碱性磷酸酶阴性，过碘酸-雪夫反应弱阳性。 结论：hESCs在体外可分化为hESC-MSCs，hESC-MSCs符合MSCs特性。

摘要:摘要：目的：构建EB病毒BMRF1-BZLF1N融合基因，并分析其克隆表达。 方法：用重叠延伸PCR将EB病毒的BMRF1基因和BZLF1N基因通过多肽接头(Gly4Ser)2的DNA序列进行连接，构建BMRF1-BZLF1N融合基因，并进行核苷酸序列测定。 结果：DNA序列分析结果表明，该融合基因BMRF1-Linker-BZLF1N的连接顺序、方向及序列完全正确。 结论：成功构建了EB病毒BMRF1-BZLF1N融合基因，为该融合基因克隆表达产物的应用研究提供了依据。

摘要:摘要： 多重耐药(MDR)菌株广泛播散，在抗菌药物的选择性压力下，随着bla_KPC耐药基因在不同菌种和菌株间播散，进一步加剧了抗感染治疗的风险和成本。本文通过对KPC型碳青霉烯酶研究的新进展作一简要综述，旨在为产KPC酶耐药细菌感染的预防、治疗及感染控制提供依据。

摘要:摘要： 外体（exosomes）是由细胞内的晚期内涵体出芽形成多泡体（multivesicular bodys, MVBs），与质膜融合后释放到胞外的囊泡。Exosomes含有丰富的RNA和蛋白质，能介导细胞间物质与信息传递。肿瘤细胞分泌的exosomes能改变肿瘤的微环境，传递遗传物质促进肿瘤的侵袭与转移，诱导耐药。负载肿瘤抗原的exosomes能介导和扩大抗肿瘤免疫，可作为新型的肿瘤疫苗。exosomes是治疗基因的天然载体，为肿瘤的基因治疗开辟新的途径。此外，循环或体液中的exosomes还可作为判断肿瘤疗效和预后的标志，具有独特的临床应用价值。

摘要:摘要： 自身免疫性胰腺炎（AIP）具有影像学、血清学和组织学特征，其发病机制与自身免疫有关。血清IgG升高，特别是IgG4升高是诊断AIP 的特征性指标;多种自身抗体，如抗胰蛋白酶原抗体、抗碳酸酐酶抗体、抗核抗体、抗乳铁蛋白抗体等对AIP具有重要的诊断和鉴别诊断价值。

摘要:摘要:目的: 研究磷酸吡哆醛（PLP）对测量表观健康人群（未排除脂肪肝患者）丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（AST）催化活性浓度的影响，初步建立血清ALT和AST的参考值。 方法：以问卷调查方式收集研究对象基本资料，并分为脂肪肝组和非脂肪肝组；将ALT、AST参考测量程序转移至生化分析仪；检测试剂含和不含PLP 时的ALT、AST：ALT1（PLP^＋）、ALT2（PLP^-）、AST1（PLP^＋）、AST2（PLP^-）；分析PLP对研究对象血清ALT和AST活性测定的影响，并建立参考值。 结果: 总人群、非脂肪肝组男、女间ALT1、ALT2、AST1、AST2差异均有统计学意义（P均＜0.05）。总人群男、女间ALT、AST激活程度差异均有统计学意义（U分别为17 985.5、19 111.0，P＜0.05）；非脂肪肝组男、女间ALT激活程度差异无统计学意义（U=9 616.0，P＞0.05），AST激活程度差异有统计学意义（U=8 947.0，P＜0.05）；脂肪肝和非脂肪肝人群的ALT激活程度和AST激活程度的差异有统计学意义（U分别为8 552.0、16 502.5，P＜0.01）。若排除脂肪肝人群，试剂中加入PLP，男性ALT参考值为9.6~43.6 U/L，女性为7.0~30.2 U/L；男性AST参考值为19.8~39.6 U/L，女性为17.9~34.3 U/L。 结论：若在纳入参考人群时严格排除脂肪肝患者，试剂中添加PLP后ALT及AST参考值与现行参考值较接近，可考虑推广加入含PLP的试剂。

摘要:摘要:目的：探讨早期B细胞因子1（EBF1）基因rs3843489单核苷酸多态性（SNP）与中国汉族人群原发性干燥综合征（pSS）的相关性。 方法：用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（MALDI-TOF-MS）技术对533例pSS患者和该563例健康人EBF1基因的rs3843489位点分型，用ELISA法检测抗SSA、SSB 抗体，同时结合高球蛋白血症的临床资料，分析位点与疾病及其血清学检测指标和临床表型的相关性。 结果：EBF1基因rs3843489位点的等位基因、基因型频率在pSS组与健康对照组间差异无统计学意义(χ²=1.16，1.29，P均＞0.05)；在3个遗传模型中，位点在两组间差异仍无统计学意义(χ²=1.20，0.15，0.01，P均＞0.05)；rs3843489位点在两组患者抗SSA、SSB抗体和高球蛋白血症中的分布差异均无统计学意义（P＞0.05）。 结论: EBF1基因rs3843489位点多态性可能与中国汉族人群pSS的易感性不相关。

摘要:摘要：目的：研究人血清标准物质对改进临床实验室总胆红素（T-Bil）测量结果正确度的价值。 方法：以北京市12家临床实验室血清T-Bil常规测量系统为例，分别用常规测量系统同时测量人血清T-Bil国家一级标准物质GBW09184、GBW09185，评价测量结果的正确度；再以GBW09184代替常规系统校准品重新测量GBW09185，分析各常规测量系统测量结果的正确度。分别用测量结果计量学可溯源、统计学可接受及临床可接受3个判断标准评价各常规系统测量结果的正确度，同时分析12家实验室测量结果的变异情况。 结果：12家实验室T-Bil常规测量系统GBW09184、GBW09185标准物质测量结果分别为95.7~137.8 μmol/L、35.3～57.4 μmol/L，均值分别为116.6 μmol/L、47.7 μmol/L，偏移分别为+7.9%、+7.0%，总变异分别为10.25%、12.80%；用计量学溯源、统计学可接受、临床可接受标准判断分别有17%（2/12）、33%（4/12）、33%（4/12）的实验室测量结果正确。除4号外的其他11家实验室校准后，T-Bil常规测量系统GBW09185标准物质测量结果为40.7～57.3 μmol/L，均值为46.3 μmol/L，偏移+3.8%，总变异为9.70%；用计量学溯源、统计学可接受、临床可接受标准判断分别有36%（4/11）、64%（7/11）、64%（7/11）的实验室测量结果正确。 结论：北京市80%临床实验室T-Bil常规测量系统测量结果的正确度不能满足ISO17511的溯源要求；人血清T-Bil国家一级标准物质可明显改善各临床实验室测量结果的正确度。

摘要:摘要：目的：了解产ESBL福氏志贺菌的耐药特征及传播方式，确定产ESBL菌株流行基因型。 方法：用纸片扩散法对产ESBL菌株初步筛选，PCR检测编码ESBL的基因，用接合试验确认产ESBL菌株耐药性的传递方式。 结果：53株福氏志贺菌中16株（30.2%）产ESBL。药敏结果显示，16株产ESBL福氏志贺菌对氨苄西林、头孢噻肟、四环素、氯霉素、磺胺甲噁唑和甲氧苄啶完全耐药，对头孢西丁、亚胺培南和庆大霉素完全敏感，其中75.0%（12/16）的菌株对头孢他啶、头孢吡肟和氨曲南耐药，37.5%（6/16）对环丙沙星耐药；所有产ESBL株接合试验阳性；16株产ESBL志贺菌扩增出CTX-M、TEM和OXA基因，测序结果分别为bla_CTX-M-15(12/16)和bla_CTX-M-14(4/16)、bla_TEM-1（11/16）、bla_OXA-30(16/16)。 结论: 济南地区福氏志贺菌存在严重多重耐药现象，流行的ESBL基因型为CTX-M-14和CTX-M-15。

摘要:摘要：目的：探讨本院耐碳青霉烯类抗菌药物肠杆菌科细菌(CRE)的耐药性及基因型。 方法：收集临床分离的30株CRE，用改良Hodge试验检测碳青霉烯酶表型，PCR检测碳青霉烯酶bla_KPC、bla_IMP、bla_VIMVIM、bla_OXA-48及bla_NDM-1基因，阳性结果进行DNA测序，BLAST比对确定基因型。 结果: 30株CRE以肺炎克雷伯菌为主，占80%；感染患者主要来自ICU；感染部位以下呼吸道为主，占93.3%；对常用抗菌药物呈多重耐药；其中25株改良Hodge试验阳性；PCR扩增和DNA测序显示11株为bla_IMP-4，12株为bla_IMP-8，未检出bla_KPC、bla_VIM、bla_OXA-48及bla_NDM-1目的基因。 结论: bla_IMP-4型和bla_IMP-8型碳青霉烯酶是本院肠杆菌科细菌产碳青霉烯酶的主要型别，且已在ICU中局部流行。

摘要:摘要：目的：根据2008年WHO诊断标准，分析真性红细胞增多症（PV）与原发性血小板增多症（ET）患者的实验室检查特征。 方法：回顾性分析114例PV、ET初诊患者血液、骨髓涂片、骨髓病理组织学及JAK2V617F基因检测结果。 结果：与ET患者相比，PV患者WBC和Hb水平增高（P<0.05），PLT下降（P<0.05），红细胞系百分数增高（P<0.05）。与JAK2V617F基因阴性PV患者相比，JAK2V617F基因阳性PV患者WBC、PLT明显增高（P<0.05），粒细胞系、粒/红比值、巨核细胞计数增高（P<0.05）。JAK2V617F基因阳性ET患者骨髓活检多见三系增生，未见骨髓纤维化。 结论：PV、ET患者及JAK2V617F基因阳性或阴性的PV、ET患者实验室检查特征不同，对指导临床诊断具有一定意义。

摘要:摘要：目的：分析空腹血糖受损（IFG）人群促炎因子MCP-1、IL-6、IL-1、TNF-α水平的变化。 方法：按空腹血糖（FBG）水平将126例研究对象分为IFG组和血糖正常组，检测血清MCP-1、IL-6、IL-1、TNF-α水平。 结果：IFG组患者IL-6、TNF-α、MCP-1水平显著高于血糖正常组（P均<0.01），且与FBG、胰岛素抵抗指数（HOMA-IR）呈正相关（r=0.365~0.440，P均<0.05）。 结论：IFG患者处于慢性炎症状态，血清IL-6、MCP-1、TNF-α升高。

摘要:摘要:目的：分析河北沧州地区遗传性耳聋的基因突变位点。 方法：对非综合征性耳聋患者（47人）和听力下降患者（21人）用基因芯片技术检测4个耳聋基因GJB2、GJB3、SLC26A4、线粒体DNA 12SrRNA的9个突变位点。 结果：耳聋组47例患者中耳聋基因突变者17例（36.2%），GJB2基因突变15例（31.9%），其中235delC纯合突变9例（19.1%），235delC杂合突变1例（2.1%），299delAT纯合突变2例（4.3%），176del16和299delAT杂合突变1例（2.1%），235delC和299delAT杂合突变2例（4.3%）；GJB3基因突变1例（2.1%）；SLC26A4基因突变1例（2.1%）。听力下降组21例患者中耳聋基因突变者7例（33.3%），GJB2基因突变3例（14.3%），SLC26A4基因突变者4例（19.0%）。结论：河北沧州地区主要见GJB2、GJB3及SLC26A4基因突变。

摘要:摘要：目的：分析不同年龄、性别的HBsAg阴性人群血清抗-HBs和抗-HBc的检出情况。 方法：收集30 860例HBsAg阴性人群血清抗-HBs和抗-HBc定量检测结果及资料，对抗-HBs和抗-HBc在不同年龄段和不同性别人群中的检出情况进行回顾性分析。 结果：抗-HBs+、抗-HBc+、抗-HBs++抗-HBc+、抗-HBs-+抗-HBc-的检出率和抗-HBs≥100 IU/L的总检出率分别为22.06%、12.62%、48.78%、16.53%和37.06%，在不同年龄段差异均有统计学意义（P均<0.01）。抗-HBs≥100 IU/L的总检出率在1~10岁（33.98%）和≥41岁（31.02%）最低，抗-HBc+和抗-HBs++抗-HBc+的检出率随年龄的降低而减低，而抗-HBs+和抗-HBs-+抗-HBc-的检出率随年龄的降低而增加；男性抗-HBs检出率和抗-HBs≥100 IU/L总检出率低于女性（P均<0.01），而抗HBc+、抗-HBs+、抗-HBc+和抗-HBs-和抗-HBc-检出率高于女性（P均<0.01）。 结论：低龄人群（1~10岁）具有较低的抗-HBs≥100 IU/L总检出率和较高的抗-HBs-+抗-HBc-检出率，对低龄人群乙肝疫苗接种应后续加强免疫。

摘要:

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