摘要:Abstract: Research efforts on non coding RNAs have grown exponentially in the past decade. We are now beginning to witness the achievements that have been made in better understanding the roles of miRNAs in human diseases such as cancer and cardiovascular diseases. miRNAs show great promise as biomarkers for cancer diagnosis and prognosis. In addition, miRNAs, due to their critical function as either oncogenes or tumor suppressor genes and their broad impact on target genes and pathways, have great potential as therapeutic agents for novel cancer drug development. Several miRNA molecules and mimics are getting close to clinical trials. In this review, we summarize and highlight some of the important findings relating to miRNA and anticancer therapeutic development.

摘要:摘要:目的：探讨携带胰岛素样生长因子2印记系统(IGF2 imprinting)的重组腺病毒靶向治疗结直肠癌的可行性。 方法：用PCR扩增H19、enhancer、CTCF 、EGFP和E1A片段并克隆至pDC-315中构建成重组腺病毒穿梭质粒，分别与腺病毒骨架共转染包装成腺病毒Ad315-EGFP和Ad315-E1A。Ad315-EGFP分别转染GES-1、HCT-116、HCT-8和HT-29细胞，荧光显微镜观察各组细胞中EGFP的表达。以H101作为阳性对照，用RT-PCR及western blot检测Ad315-E1A和H101转染后各组细胞中E1A基因和蛋白质的表达； 用MTT法和流式细胞术检测Ad315-E1A体外抗肿瘤效应。构建皮下移植瘤裸鼠模型，检测Ad315-E1A的体内抑瘤作用。 结果：Ad315-EGFP转染各组细胞，EGFP仅在IGF2 LOI细胞HCT-8和HT-29中表达；各组细胞经Ad315-E1A转染后，E1A基因和蛋白质仅在LOI细胞（HCT-8和HT-29）中表达；HCT-8细胞经Ad315-E1A 10 PFU/cell转染72 h后，增殖活力降低至(53.4±6.4)%，凋亡率升高至(23.9±3.7)%；经H101转染的各组细胞，E1A基因和蛋白质仅在p53突变的细胞HT-29中表达；多点注射Ad315-E1A治疗HCT-8移植瘤显示其抑瘤率达32.1%。 结论：成功构建了携带IGF2印记系统的重组腺病毒；重组腺病毒Ad315-E1A能够有效杀伤IGF2 LOI结直肠癌细胞。

摘要:摘要：目的：探讨miR-34a对人乳腺癌细胞系MCF-7多柔比星（Adr）耐药性的影响及其潜在分子机制。 方法：用低浓度逐步加量诱导法，建立MCF-7的Adr耐药细胞系（MCF-7/Adr），用miRNA芯片结合RT-qPCR筛选并验证miRNA在MCF-7/Adr及MCF-7细胞中的表达差异；用生物信息学软件对miR-34a进行基因靶向预测；通过miR-34a模拟物(mimic)和抑制物(inhibitor)转染实验结合MTT、实时荧光定量PCR(RT-qPCR)观察miR-34a的表达变化对细胞耐药性的影响，western blot检测转染后Notch1蛋白表达水平。 结果：成功构建MCF-7/Adr耐药亚系；与MCF-7细胞相比，MCF-7/Adr中有156个差异表达miRNA；其中miR-34a的表达水平明显降低（t=11.597，P=0.000）。与阴性对照组相比，转染miR-34a mimic后MCF-7/Adr细胞miR-34a表达水平增高（t=8.013，P=0.001），且增加了对Adr的敏感性（t=18.160，P=0.000）；转染miR-34a inhibitor后MCF-7细胞miR-34a的表达水平降低（t=9.979，P=0.000），且降低了对Adr的敏感性（t=4.130，P=0.009）。靶基因预测结果显示，Notch1为miR-34a的特异性靶基因。western blot结果表明，与空白对照组和阴性对照组相比，MCF-7/Adr细胞转染miR-34a mimic后，Notch1蛋白的表达水平下降（F=64.949，P=0.000）。MCF-7细胞转染miR-34a inhibitor后，Notch1蛋白的表达水平升高（F=10.938，P=0.010）。 结论：MCF-7/Adr及MCF-7细胞miRNA表达谱存在差异；miR-34a参与调节细胞对Adr的耐药过程，Notch1基因可能是调控靶基因之一。

摘要:摘要：目的：用RNA干扰（RNAi）技术抑制CD147基因的表达，检测其对人结直肠癌细胞系HT29细胞增殖、侵袭和致瘤能力的影响。 方法：设计合成CD147特异性的RNA干扰表达质粒pYr-mir30-shRNA，稳定转染HT29细胞，分别获得HT29/shRNA control和HT29/shRNA细胞;RT-PCR和western blot分别检测CD147、MCT1、MCT4 mRNA和蛋白质的表达;明胶酶谱法检测MMP-2和MMP-9的活性;CCK8法分析细胞的增殖能力;Transwell 小室检测细胞的侵袭能力;观察结直肠癌裸鼠皮下移植瘤的致瘤能力。结果：与空白组比较，RNA干扰后的细胞中CD147、MCT1 mRNA（F分别为99.645和84.985）及蛋白质（F分别为73.675和19.842）的表达水平均降低（P均<0.01）;MMP-2和MMP-9的活性均降低（P均<0.01）;细胞增殖（t分别为7.491、15.023、14.584、6.637和11.211，P均<0.01）和侵袭（F=330.443，P<0.01）能力均降低，使裸鼠荷瘤能力下降（F=365.679，P<0.01）。结论：RNA干扰能有效抑制CD147基因的表达，抑制HT29细胞的增殖和侵袭能力。

摘要:摘要：目的：探索长链非编码RNA（lncRNA）91H对食管鳞癌（ESCC）组织中胰岛素样生长因子2(IGF2)异常表达的调控机制，评价其在ESCC发生、发展中的作用。 方法：收集232例ESCC患者癌组织和癌旁组织标本以及食管鳞癌细胞系TE-1和Eca-109，用实时荧光定量PCR及免疫荧光法检测其91H和IGF2的表达水平，亚硫酸氢盐修饰后测序法(BSP) 检测印记基因H19调控区域(ICR)的甲基化程度。 结果：肿瘤患者浸润程度越深、肿瘤等级和TNM分期越高，91H的表达量越低而IGF2表达量越高，P<0.05)，用91H RNA干扰后，TE-1细胞IGF2 mRNA的表达水平为4.91±1.68，明显高于阴性对照组1.38±0.61（P<0.05）；Eca-109细胞IGF2 mRNA的表达水平为3.62±1.44，明显高于阴性对照组1.75±1.00（P<0.05）；经5-aza-CdR去甲基化处理后，细胞甲基化程度越低，91H表达水平越高（P<0.05）。结论：lncRNA 91H的表达与H19 ICR区甲基化程度密切相关，其对IGF2表达起抑制作用，提示lncRNA 91H可作为一个新的遗传学标志物。

摘要:摘要：目的：探讨不同浓度的荧光染料（Hoechst 33342）和抑制剂维拉帕米（verapamil）对流式细胞仪分选侧群（SP）细胞的影响。 方法：实验分为Hoechst 33342组(Hoechst 33342浓度分别为2.5、5.0和7.5 μg/mL)和抑制组（Hoechst 33342+verapamil，verapamil浓度分别为50、100和150 μmol/L），用流式细胞仪分选人肺腺癌细胞系A549中SP细胞，摸索Hoechst 33342和verapamil的最佳浓度，并用本实验室构建的一株肿瘤细胞系K1进行验证。 结果：在verapamil和Hoechst 33342浓度分别为150 μmol/L和7.5 μg/mL时，A549细胞染色充分，SP细胞亚群与非SP(non-SP)细胞亚群分群明显，SP细胞约为2.2%。K1细胞在verapamil为50 μmol/L和Hoechst 33342为5 μg/mL时，SP细胞亚群与non-SP细胞亚群分群明显，SP细胞亚群可被verapamil抑制，其比例约为1.3%。分选后的SP细胞和non-SP细胞可进一步扩增培养。 结论：Hoechst 33342和verapamil可影响肿瘤细胞中SP细胞分选效率。

摘要:摘要：目的：探讨micorRNA-335（miR-335）表达及甲基化水平在多发性骨髓瘤（MM）诊断中的应用。 方法：用荧光定量PCR检测43例MM患者和30例体检健康者外周血单个核细胞（PBMC）中miR-335的表达水平，用甲基化特异性PCR（MSP）检测miR-335启动子区甲基化水平，分析其与各临床指标的相关性。 结果：43例MM患者PBMC中miR-335的表达水平为34.8（15.3，84.9），显著低于健康对照组的269.4（63.3，780.2），Z=4.384，P<0.05。11例MM患者（25.6%，11/43）呈现完全甲基化，其余患者均为部分甲基化，而23例体检健康者（76.7%）呈现完全非甲基化（Uc=6.62，P<0.05）。初诊MM患者miR-335表达量高于复发/进展期患者（Z=2.309，P<0.05），但复发/进展期患者中miR-335启动子区甲基化程度（75%）高于初诊患者（25%），T=24.5，P<0.05。MM患者miR-335表达水平与轻链λ浓度呈相关性（r=0.51，P<0.05）。 结论：MM患者miR-335表达水平和甲基化可作为MM潜在的辅助诊断指标。

摘要:摘要：目的：检测可溶性LAG-3(soluble LAG-3，sLAG-3)在胃癌患者血清中的水平及其诊断价值。 方法：用ELISA法检测92例胃癌患者及50例体检健康者血清中sLAG-3的含量，并分析胃癌患者血清sLAG-3水平与临床病理特征之间的关系。用ROC曲线分析sLAG-3作为胃癌诊断标志物的价值。电化学发光法检测标本的CEA表达水平，比较两者的诊断效率。 结果：胃癌患者血清sLAG-3含量的中位数（四分位数间距）为137.1（78.2,356.8）ng/mL，显著低于健康对照组血清的711.4（504.8,1 089.4)ng/mL(Z=7.513,P<0.01)。胃癌患者血清sLAG-3含量与肿瘤分期、分化程度及浸润深度均有显著相关(Z分别为2.196,2.167和2.022，P均<0.05)，而与其他临床病理特征无关。sLAG-3诊断胃癌中的敏感性(75.00%)和准确性(81.7%)均高于CEA(16.3%和43.7%)。 结论：sLAG-3可作为胃癌诊断的潜在血清标志物。

摘要:摘要：目的：探讨pre-miR-146a rs2910164（C>G）位点多态性与癌症易感性的关系。 方法：通过Pubmed和Embase数据库全面检索相关文献，用固定效应模型或随机效应模型进行数据合并，用STATA 12.0软件分析，并由Begg漏斗图和Egger检验来评估发表偏倚。 结果：37篇文献被纳入分析，包括18 736例癌症患者和25 417例对照者。用荟萃（meta）分析结合风险比（odd ratio，OR）及95%可信区间（CI）分析，发现rs2910164与整个癌症易感性无显著关联。种族分层分析发现，rs2910164 G等位基因可增加亚洲人群（GG vs CC: OR=1.19, 95%CI=1.02~1.39; GG vs GC+CC: OR=1.11, 95%CI=1.00~1.23）、降低高加索人群（GG vs GC+CC: OR=0.89, 95%CI=0.80~0.99）对癌症的易感性。癌症类型的分层分析发现，rs2910164 G等位基因与肝细胞癌（GG vs CC: OR=1.47, 95%CI=1.19~1.80; GG vs GC+CC: OR=1.25, 95%CI=1.05~1.47）的易感性相关。 结论：rs2910164 G等位基因可增加亚州人群、降低高加索人群对癌症的易感性，并与肝细胞癌的易感性相关。

摘要:摘要： 肿瘤生物样本资源库作为基础研究向临床应用转化的平台，在医学研究、临床诊断、转化医学和流行病学研究中发挥着重要作用。建立符合国际标准、统一化、规模化与共享化的肿瘤生物样本资源库有利于开展恶性肿瘤的系列研究。本文就肿瘤生物样本资源库建立的必要性、规范化建设与管理以及未来发展趋势进行综述，为构建肿瘤生物样本资源库提供新策略。

摘要:摘要：目的：通过评估XN-2000血液分析仪对PLT计数的检测性能，初步探讨联合人工镜检法和血液分析仪自动复检功能来制定低值PLT的复检规则。 方法：用XN-2000血液分析仪的3种通道计数650例新鲜全血标本的PLT，得出荧光PLT计数（PLT-F），电阻抗PLT计数（PLT-I）和光学PLT计数（PLT-O）。比较分析PLT-F、PLT-I和PLT-O的精密度及其与流式细胞分析法（FCM）和镜检法计数PLT的一致性。进而对本实验室原有的低值PLT复检规则重新进行制定。 结果：PLT-F变异系数（CV）为2.7%～4.7%，低于PLT-I和PLT-O的4.2%～16.2%。PLT在（2～50）×10⁹/L区间时，PLT-F与FCM法PLT计数的一致性高于PLT-I和PLT-O，r分别为0.969、0.826和0.950,PLT-F与镜检法PLT的一致性也高于PLT-I和PLT-O，r分别为 0.914、0.874和0.898,提示PLT-F检测低值PLT的准确性优于PLT-I和PLT-O。通过对本实验室原有的低值PLT复检规则的重新制定，使复检的假阴性率降为零，人工复检率下降了51.47%（158/307）。新的复检规则为：当PLT-I＜80×10⁹/L时，自动追加PLT-F检测，如果没有PLT相关报警出现，可直接报告PLT-F结果；当出现报警时，进行人工镜检，报告镜检PLT结果。 结论：与PLT-I及PLT-O相比，低值PLT-F检测具有更好的精密度和准确性。通过重新制定复检规则，可明显降低低值PLT的人工复检率。

摘要:摘要：目的：探讨高三酰甘油血症（HTG）合并急性心肌梗死（AMI）男性患者载脂蛋白A5（apo A5）基因甲基化对apo A5表达水平的影响。 方法：选取HTG合并AMI男性患者为病例组，选取HTG合并颈动脉粥样硬化（As）男性患者为对照组，每组各18例。用Illumina人类全基因组DNA甲基化450K芯片检测两组患者外周血DNA甲基化变化，用生物信息学方法分析比较两组间apo A5基因的甲基化差异；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-PCR）检测apo A5 mRNA表达水平； ELISA法检测血浆apo A5水平。 结果：全基因组甲基化芯片初步筛选结果显示，与对照组相比，病例组apo A5基因表现为高甲基化；RT-PCR和ELISA检测结果显示，病例组apo A5 mRNA及apo A5表达水平低于对照组［（0.037±0.016）vs（1.000±0.093），（156.6±16.8）μg/L vs（197.3±32.3）μg/L，t分别为18.970和2.502， P均<0.05］。 结论：HTG合并AMI男性患者apo A5的mRNA和apo A5蛋白表达水平均降低与该基因甲基化水平增高有关，apo A5基因甲基化异常可能参与HTG患者的As进展。

摘要:摘要：目的：观察HCV感染者的抗SSA/Ro52抗体的情况。 方法：选取HCV感染者123例、SLE患者61例、干燥综合征（SS）患者20例和健康人对照52例，用线性免疫印迹法（LIA）筛查抗SSA/Ro52抗体；间接ELISA检测抗SSA/Ro52抗体IgG亚型。 结果：HCV感染者检出率最高的是抗SSA/Ro52 抗体29例，单项阳性20例；SLE患者抗SSA/Ro52抗体阳性39例，单项阳性1例；SS患者抗SSA/Ro52 抗体阳性17例，单项阳性2例；健康人对照0例。HCV感染者抗SSA/Ro52抗体阳性率低于SLE和SS患者，差异有统计学意义（P均<0.01）。抗SSA/Ro52抗体阳性者中，HCV感染的单项阳性率高于SLE和SS患者，差异有统计学意义（P均<0.01）。HCV感染抗SSA/Ro52抗体阳性率与性别、年龄无关；抗SSA/Ro52抗体IgG亚型阳性率依次为IgG1（83%）、IgG3（31%）、IgG2（17%）、IgG4（7%）。 结论：单项抗SSA/Ro52抗体阳性是区分HCV感染是否合并SS的重要指标之一。

摘要:摘要:目的：构建白念珠菌β-葡萄糖苷酶2（BGL2）的原核细胞表达质粒，诱导其表达后加以鉴定，并初步判定重组蛋白质的免疫反应性。 方法：PCR法获取白念珠菌SC5314的bgl2基因，插入原核细胞表达载体pET30a中，以重组质粒转染感受态细胞大肠埃希菌（E.coli） BL21，经IPTG诱导表达后，SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（PAGE）检测蛋白质的表达情况，梯度透析法对包涵体蛋白质复性，用抗His标签单克隆抗体鉴定。用临床侵袭性念珠菌病（IC）患者血清判定重组蛋白质的免疫反应性。 结果：成功构建原核细胞表达质粒pET30a-bgl2，诱导后的重组蛋白质以包涵体形式表达，经梯度透析复性成功。重组蛋白质能被抗His标签抗体识别，并与IC患者血清有良好的反应性。 结论：用原核细胞表达体系成功表达了白念珠菌BGL2，该蛋白质具有良好的免疫反应性，为进一步研究其在IC诊断中的作用打下基础。

摘要:摘要： 细菌感染的爆发流行是当今社会的常见问题，对菌株的正确分型是进行细菌流行病学及抗菌药物研究的关键。现代分子生物学技术的发展为细菌分型提供了可靠的保证，在判定感染的爆发、确定感染的病原菌、寻找感染源以及识别一些特殊致病菌等方面发挥着重要作用。目前，正致力于研究速度更快、成本更低、通量更高、更适用于应对突发事件和临床检验的测序分型方案。

摘要:摘要：目的：评价室间质量评价(室间质评)活动中WBC、RBC、Hb、PLT、HCT 5项指标靶值的不确定度。 方法：以2013年第1次临床血液检验指标能力验证计划为例，参考ISO 13528介绍的稳健统计方法，计算稳健均值（x^*，靶值）、稳健标准差（s^*）和靶值的标准不确定度（u_x）。 结果：以稳健标准差作为能力评定标准差（σ＾），u_x均≤0.3σ＾，满足GB/T 28043-2011要求。 结论：评价了5项指标靶值的不确定度，均满足能力验证计划要求。

摘要:摘要：目的：评估Roche公司cobas e601电化学发光免疫分析系统和BioMerieux公司mini-VIDAS免疫分析系统降钙素原（PCT）测定结果间的可比性、相对偏差及其临床可接受性。 方法：参考EP9-A2文件，共收集40份新鲜临床血清样本，其PCT浓度覆盖检测系统的测定范围。用2种检测系统同时测定标本，以cobas e601检测系统作为比较方法，对mini-VIDAS检测系统的测定结果进行线性回归及相对偏差评估。 结果：两检测系统PCT测定结果间相关系数r=0.996，直线回归方程为Y=1.137X+0.636，在2.00 ng/mL和10.00 ng/mL水平处的相对偏差分别为45.50%和20.06%。 结论：两系统检测结果的相对偏差不能被临床所接受，需采取适当的校正措施。

摘要:摘要：目的：探讨多重耐药铜绿假单胞菌（MDR-PA）中接合性质粒、转座子、整合子、插入序列等可移动遗传元件的存在情况。 方法：从临床标本中分离并筛选出49株MDR-PA，用PCR分析接合性质粒遗传标记基因(traA,trbC,traF)、转座子遗传标记基因(tnpA,tnpU,tnsA,merA,tnp513)、插入序列遗传标记基因(ISEcp1,IS26,ISaba1,IS903,ISpa7,ISKpn6,ISKpn7,IS1133,ISCR1,ISCR3/14)、整合子遗传标记基因(IntI1,IntI2,IntI3)共21种可移动遗传元件。 结果：49株MDR-PA共检出11种可移动遗传元件相关基因，阳性率最高的为IS2677.6%）；阳性基因构成模式IS26+ISaba1+ISCR3/14+IntI1检出率最高，共7株（14.3%）；首次在铜绿假单胞菌中检出接合性质粒遗传标记traF；49株MDR-PA中只有2株未检测到可移动遗传元件。 结论：接合性质粒、插入序列、转座子、整合子4类可移动遗传元件在本组MDR-PA中均有检出，这些可移动性遗传元件介导多种耐药基因使菌株表现为多重耐药。

摘要:摘要：目的：分析体检人群对蟹过敏原食物不耐受情况及蟹特异性IgG所识别的蛋白质成分。 方法：用丙酮去脂、PBC浸取法提取中华绒螯蟹蛋白质液，用粗提蛋白质作为包被抗原，用间接ELISA法检测391例体检人群血清中特异性IgG抗体，分析不同年龄、性别间对蟹的不耐受率差异；用SDS-PAGE分析粗提蛋白质组分，并以筛选出的抗体效价较高的血清作为识别抗体，用western blot分析提取液中主要与特异性IgG结合的成分。 结果：在391例血清中，蟹不耐受率为39.9%，其中轻度不耐受率为35.1%，中度不耐受率为4.9%。青年组中蟹不耐受率为25.4%，中、老年组中蟹不耐受率为65.0%，差异有统计学意义；男、女对蟹的不耐受率无明显统计学差异。不同个体血清的western blot图谱（条带）存在差异。 结论：人群中某些个体存在蟹蛋白质的特异性IgG抗体，但只有部分个体抗体效价较高，并且特异性抗体所识别的蛋白质组分存在个体差异。

摘要:摘要： 实验室信息系统（LIS）是临床实验室的重要组成部分，对其进行科学、合理的管理和维护对保障实验室工作有序进行有着重大意义。本研究对本实验室2013年1~9月对LIS提出的维护需求进行统计分析，为临床实验室对LIS的管理、有效维护提供经验。