2017(3):161-164.
摘要:摘要:外泌体(exosome)是一类可由多种细胞分泌并包裹了蛋白质、mRNA、微小RNA(microRNA)、非编码RNA(lncRNA)、DNA、脂质等物质的膜性囊泡,研究发现exosome在细胞间通讯、肿瘤免疫、肿瘤治疗、组织损伤修复、疾病诊断中具有重要的意义。对不同来源的exosome携带的内容物进行分析并筛选其特异性的分子标志物,将为相关疾病的诊断及其发生发展的研究提供非常重要的帮助。Exosome可以在血液、尿液、唾液、胸腹水、乳汁、脑脊液、肺泡灌洗液等体液中被检出。随着exosome分离和分析检测技术的发展,越来越多分子标志物被发现,exosome内分子标志物有望为恶性疾病的早期诊断、预后判断提供新的依据。
孔令印 , 王挺 , 贺权责 , 冒燕 , 申静静 , 宣黎明 , 祝轶君 , 薛永峰 , 孙丹凤 , 刘慧敏 , 梁波
2017(3):165-168.
摘要:摘要:目的:建立一种基于染色体特异位点测序进行无创产前检测的方法,以替代目前传统的基于全基因组测序的无创产前检测技术。 方:采集200例已知胎儿核型的孕妇血浆样本,通过数据库筛选挑选出13、18、21号染色体上特异性的位点,通过探针捕获的方式进行特异性片段的捕获,针对特异性片段进行测序分析,通过Z值计算来判断是否存在染色体非整倍体异常。 结果:染色体特异位点筛选法检出7例21三体胎儿、3例18三体胎儿,1例13三体胎儿,结果与全基因组高通量测序法一致。 结论:基于染色体特异位点测序法具有检测成本低、检测通量高的优势,有望替代全基因组高通量测序法进行无创产前筛查。
赵瑞 , 李鹏飞 , 于伟越 , 杜萍 , 赵志霞 , 刘洪川 , 刘丽宏
2017(3):168-170.
摘要:摘要:目的:分析液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)法与循环酶法测定人血清中同型半胱氨酸(homocysteine,HCY)浓度的相关性。 方法:收集63例患者的血清样本,用LC-MS/MS法和循环酶法分别测定相同样本的HCY浓度,并评价2种方法的相关性。 结果:LC-MS/MS法与循环酶法对HCY浓度测定的结果分别为(19.11±15.69)μmol/L和(16.95±14.41)μmol/L,差异有统计学意义(t=6.25,P<0.05)。2种方法的线性回归方程为YLC-MS/MS法=1.074X循环酶法+0.892,相关系数(R)=0.987,相关性较好。 结论:LC-MS/MS法与循环酶法测定血清中HCY浓度的相关性较好,LC-MS/MS法适用于临床对HCY的检测。
李阳 , 潘磊 , 梁炜 , 张鹏 , 钱晖 , 许文荣 , 张志坚 , 蒋鹏程 , 张徐
2017(3):171-174.
摘要:摘要:目的:检测胃癌患者血清外泌体(exosome)中抗分化非编码RNA(DANCR)的表达水平并分析其临床应用价值。 方法:采用实时荧光定量RT-PCR检测胃癌细胞培养上清和胃癌患者血清exosome中DANCR表达水平,分析其与临床病理资料的相关性,绘制ROC曲线评价其诊断效能。 结果:DANCR在人胃癌细胞系HGC-27中表达水平(4.43±0.37)明显高于胃黏膜上皮细胞(1.01±0.01),差异有统计学意义(P<0.05)。HGC-27细胞培养上清exosome中DANCR表达水平(3.06±0.14)明显高于GES-1细胞(1.01±0.20),差异有统计学意义(P<0.05)。DANCR在胃癌患者血清exosome中的平均含量[5.060(1.380, 22.785)]较胃良性疾病患者[0.535(0.340, 1.380)]和体检健康者[1.200(0.605, 1.655)]明显升高(Z分别为-3.409,-4.229, P均<0.01),且与肿瘤大小、TNM分期以及淋巴结转移相关。胃良性疾病患者与体检健康者相比,血清exosome中DANCR含量差异无统计学意义(Z=-1.308, P>0.05)。胃癌患者血清exosome中DANCR的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.777,95%可信区间(CI)为0.678~0.876,cutoff值2.50,敏感性为68.6%,特异性为84.4%。 结论:胃癌患者血清exosome中DANCR表达水平升高,有望成为胃癌诊断的新指标。
时永辉 , 王成 , 郭鹏涛 , 张辰宇 , 汪俊军 , 张春妮
2017(3):175-188.
摘要:摘要:目的:检测并比较藏族和汉族健康人群血浆miRNA表达谱。 方法:分别采集246例藏族健康人和128例汉族健康人血浆样本,用TaqMan低密度芯片技术对50例藏族和50例汉族组成的2组人混合血浆中的754种miRNA进行检测,随机选取存在miR-130a-3p和miR-629-5p表达差异的样本,用qRT-PCR法进行验证。 结果:低密度芯片结果显示,藏族和汉族健康人群血浆中miRNA表达谱的相关系数(r)为0.592。与汉族组相比,藏族组血浆中139种miRNA的表达水平发生明显改变,其中62种miRNA表达上调,77种miRNA表达下调。qRT-PCR进一步证实miR-130a-3p 和 miR-629-5p在藏族组血浆中的含量明显高于汉族组[(467±27.30) ×10-5 vs(236±9.69) ×10-5和(14.67±0.94)×10-5 vs(7.58±0.52)×10-5,P均<0.01]。 结论:藏族人群血浆miRNA的表达谱与汉族人群存在明显差异,临床检测miRNA时应考虑民族因素的影响。
2017(3):178-180.
摘要:摘要:目的:探讨CD55/CD59及嗜水气单胞菌毒素变异体(FLAER)在阵发性睡眠性血红蛋白尿症(PNH)患者中的表达水平。 方法:用流式细胞仪检测30例健康人对照及13例PNH患者外周血红细胞和粒细胞表面抗原CD55/59缺失率,以及粒细胞和单核细胞FLAER缺失率。 结果:PNH患者红细胞CD55/59抗原缺失率(40.21±7.45,56.14±9.27)、粒细胞CD55/59抗原缺失率(55.52±13.40,72.63±16.26)、单核及粒细胞FLAER缺失率(83.60±11.92,87.37±10.53)均高于健康人对照组(P均<0.05);PNH患者粒细胞CD55/59抗原缺失率明显高于红细胞,且在同种细胞中CD59缺失率亦高于CD55(P<0.05);PNH患者粒细胞FLAER缺失率明显高于粒细胞CD55/59抗原缺失率(P<0.05)。 结论:CD55/59和FLAER在PNH患者中的缺失率较高,且在粒细胞中FLAER缺失率更高。
朱培冉 , 吴秋月 , 余毛毛 , 张明超 , 倪梦霞 , 刘帅妹 , 蒋卫军 , 张静 , 李卫巍 , 曹进 , 李伊 , 薛春燕 , 夏欣一
2017(3):181-183.
摘要:摘要:目的:对一汉族玻璃体淀粉样变性家系的致病基因Transthyretin(TTR)进行检测,明确该家系玻璃体淀粉样变性的致病基因突变位点。 方法:采集该家系9个成员(包括临床确诊患者2例,无症状者7例)外周血,提取其基因组DNA。用PCR技术对TTR基因的4个外显子进行扩增,并对扩增产物进行Sanger测序;同时选取100例无血缘关系的健康人作为对照。 结果:该家系8例受检者中有4例受检者检测到TTR第2号外显子中第35位的密码子发生了A>C(Lys35Thr)的杂合突变,而100例健康人对照组中均未发现相同突变。 结论:TTR基因Lys35Thr杂合突变是导致该家系玻璃体淀粉样变性的致病基因。
2017(3):184-188.
摘要:摘要:目的:探究L-6基因(rs6949149、rs1800796、rs10499563) 及其受体(IL-6R)基因(rs2228145)单核苷酸多态性(SNP)与淮安盱眙地区汉族人群胃癌发病风险的相关性。 方法:采用病例对照研究,纳入胃癌患者400例为病例组,体检健康人群400例为对照组。用Mass-Array技术检测基因多态性位点的基因型。采用Logistic回归模型分析各基因型与胃癌发病风险的关系。 结果:IL-6 rs1800796位点各基因型在2组中的差异有统计学意义(χ2=6.213,P=0.045),IL-6 rs1800796 GG基因型与胃癌的发病风险相关(校正后OR=1.27,95%CI:1.15~3.20,χ2=6.326,P=0.012)。分层分析结果显示,IL-6 rs1800796 GG基因型在女性亚组(校正后OR=3.99,95%CI:1.36~11.71,χ2=6.358,P=0.012)及H pylori(Hp)感染阳性亚组(校正后OR=2.20,95%CI:1.08~4.45,χ2=4.770,P=0.029)与胃癌的发病风险相关。 结论:IL-6 rs1800796 GG基因型与胃癌的发病风险相关,此风险在Hp感染及女性群体尤其明显。
2017(3):189-192.
摘要:摘要:目的:探讨血清游离脂肪酸(free fatty acid, FFA)及尿足细胞标志蛋白(podocalyxin, PCX)在2型糖尿病肾病(diabetic nephropathy, DN)中的诊断价值。 方法:选取120例2型糖尿病患者,依据尿清蛋白/尿肌酐比值(urinary albumincreatinine ratio, UACR)将患者分为正常清蛋白尿组(NA)、微量清蛋白尿组(MA)和大量清蛋白尿(LA)3组;选取同期体检健康者40例作为对照组。检测各组血清FFA和尿PCX水平并进行相关性分析,采用ROC曲线评估其对DN的诊断价值。 结果:NA组、MA组、LA组以及健康人对照组血清FFA检测结果分别为(0.61±0.14)、(0.81±0.13)、(0.95±0.18)和(0.49±0.11) mmol/L,尿PCX检测结果分别为(1.86±0.45)、(4.47±1.48)、(6.72±1.40)和(1.38±0.24) ng/mL,糖尿病患者血清FFA和尿PCX均高于健康人对照组,差异有统计学意义(P均<0.05),并随着疾病进展而升高。Pearson相关分析显示,血清FFA与尿PCX呈正相关(r=0.73,P<0.05)。血清FFA和尿PCX单独检测诊断DN的敏感性分别为 74.1%和80.6%,联合检测的敏感性为89.5%(P<0.05)。 结论:2型糖尿病患者肾损伤时血清FFA和PCX明显升高,两者对于DN诊断具有重要的临床价值。
许伟伟 , 许昌 , 谭慧芳 , 吕映频 , 祁秀娟 , 王秋阳 , 叶园英 , 王圆圆
2017(3):193-195.
摘要:摘要:目的:探讨多囊卵巢综合征(PCOS)患者外周血淋巴细胞miR-21、miR-27a、miR-27b的表达水平与肥胖及相关代谢紊乱的关系。 方法:收集PCOS患者60例(非肥胖组22例,肥胖组38例)。电化学发光法检测其血清促卵泡素(bFSH)、促黄体生成素(bLH)、雌二醇(bE2)、孕激素(bP)、睾酮(bT)、空腹胰岛素(FINS)水平,葡萄糖氧化酶法测定葡萄糖(Glu),实时荧光定量PCR(qPCR)法检测淋巴细胞miR-21、miR-27a、miR-27b的表达水平。肥胖组控制体重后复测上述指标。 结果:肥胖组bT、Glu、FINS、HOMAIR水平均明显高于非肥胖组(P均<0.05);肥胖组控制体重后BMI、bLH、bT、Glu、FINS、HOMAIR水平较控制前均明显降低(P均<0.05)。肥胖组miR-21、miR-27a、miR-27b的表达水均明显高于非肥胖组(P均<0.05),且控制体重后较控制前亦明显降低(P均<0.05)。miR21的表达量与bT呈正相关(r=0.342,P=0.008),miR-27a、miR-27b的表达量与FINS呈正相关(r=0.413,P=0.001;r=0.397,P=0.002)。 结论:miR-21、miR-27a和miR-27b可能参与PCOS患者肥胖及相关代谢紊乱的进程。
范玲玲 , 黄修菊 , 刘新莲 , 王丹 , 祖力比艳·依玛木江 , 陈志芳
2017(3):196-198.
摘要:摘要:目的:探讨人端粒酶RNA(hTERC)及原癌基因C-MYC在新疆维吾尔族妇女宫颈病变筛查中的临床应用价值。 方法:收集1 000例新疆维吾尔族妇女的宫颈脱落细胞,均行宫颈液基薄层细胞学(TCT)、高危型HPV筛查(HR-HPV)及荧光原位杂交技术(FISH)检测hTERC和C-MYC基因,任一指标阳性者行阴道镜下活检,分析hTERC、C-MYC基因在细胞学及病理学分级中的表达水平,ROC曲线分析hTERC和C-MYC基因单一和联合检测对高级别宫颈病变(≥CIN Ⅱ期)的临床诊断效能。 结果:hTERC、C-MYC基因表达水平均随宫颈病变程度的升高而升高。hTERC基因单独诊断宫颈高级别病变(≥CIN Ⅱ期)的ROC曲线下面积(AUCROC)为0.879,C-MYC基因为0.835,两者联合检测为0.904,且两者联合检测的敏感性(90.77%)、阴性预测值(96.00%)和准确性(90.22%)均高于单一指标检测。 结论:hTERC、C-MYC基因可作为临床宫颈病变高级别筛查的指标。
2017(3):199-202.
摘要:摘要:外泌体(exosomes)是一种所有细胞都释放的胞外囊泡,其直径为30~150 nm。外泌体包含了DNA、RNA和蛋白质等内容物。外泌体可以调节细胞间通讯,活化它们所参与或相互作用的细胞内信号通路。外泌体可在肿瘤微环境中检测到,越来越多的证据表明外泌体在促进肿瘤生长中起到重要作用,其参与血管生成、免疫应答和肿瘤转移等活动。循环中的外泌体可能会成为液体活检且无创的生物学标志物应用到肿瘤患者的早期检测、诊断和治疗中
2017(3):203-205.
摘要:摘要: 肝癌是常见的恶性肿瘤之一,目前临床主要采取手术为主、介入、局部放疗和化疗为辅的综合治疗方法,但多数肝癌患者治疗后易复发,且缺乏有效的治疗药物和手段,疗效欠佳。免疫治疗特别是细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)、树突状细胞(DC)CIK、介导嵌合抗原受体修饰的T淋巴细胞(CAR-T)等免疫细胞治疗可调节机体免疫功能,诱导抗肿瘤免疫应答,为免疫细胞在肝癌治疗中的应用提供了实验依据。该文就免疫细胞治疗在肝癌临床治疗中的应用进展作一综述。
2017(3):206-208.
摘要:摘要:Homer是一种突触后支架蛋白,由Homer1、Homer2、Homer3蛋白及其剪接体组成。Homer蛋白参与调节细胞信号转导、突触形成、受体聚集及细胞外谷氨酸水平,越来越多的研究表明其构成的改变与药物成瘾、阿尔茨海默病、听力障碍、急性髓细胞性白血病及实体肿瘤等多种疾病的发生、发展机理密切相关,提示其在疾病中可能具有重要的作用,该文通过综述Homer蛋白在疾病中的研究进展,展望其可能的临床应用价值。
2017(3):209-211.
摘要:摘要:长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)是一类长度大于200个核苷酸、不具有编码蛋白质功能的RNA转录本。近年来研究发现LncRNA通过转录、转录后及表观遗传学等调控基因表达,尤其是对肿瘤的发生、发展、增殖、转移和预后等病理过程有密切的联系。该文主要针对H19在肿瘤中作用机制研究作一综述。
2017(3):215-220.
摘要:摘要:目的: 探讨雷帕霉素靶蛋白(mTOR)在抗β2糖蛋白I(β2GPI)/β2GPI复合物诱导THP-1细胞组织因子(TF)表达中的作用。 方法:用抗β2GPI抗体/β2GPI和β2GPI/IgG-APS处理THP-1细胞,mTOR抑制剂雷帕霉素(100 nmol/L)进行干预实验;收集细胞总RNA和蛋白质,实时定量PCR(RT-qPCR)和TF活性试剂盒分别检测THP-1细胞中TFmRNA表达水平及其活性,western blot检测THP-1细胞中mTOR、磷酸化mTOR(p-mTOR)、p38、p-p38、ERK1/2、p-ERK1/2、JNK、p-JNK、NF-κB p65和p-NF-κB p65的表达情况。 结果:抗β2GPI抗体/β2GPI和β2GPI/IgG-APS复合物均能明显增加THP-1细胞TF mRNA和TF活性以及mTOR磷酸化水平(P均<0.05);雷帕霉素能明显降低抗β2GPI抗体/β2GPI和β2GPI/IgG-APS诱导THP-1细胞TF的表达水平以及mTOR磷酸化的效应(P均<0.05),也能明显地削弱p38、ERK1/2和NF-κB p65的磷酸化水平(P均<0.05),而对JNK的磷酸化水平无抑制效应(P>0.05)。 结论:抗β2GPI抗体/β2GPI复合物能够刺激THP-1细胞mTOR的活化,并能影响TF的表达。
2017(3):221-225.
摘要:摘要:目的:探讨含SUN(Sad, UNC-84)结构域的人睾丸蛋白SPAG4L(spermassociated antigen 4 like)与具有KASH(Klarsicht, ANC-1 and Syne homology)结构域的核膜血影重复蛋白3(nuclear envelop spectrin repeat proteins 3,Nesprin-3)之间的相互作用。 方法:用生物信息学方法对SPAG4L蛋白进行分析,通过体外转染实验,观察SPAG4L的亚细胞定位;并用免疫荧光技术、免疫共沉淀和双分子荧光互补实验检测SPAG4L是否与KASH结构域蛋白Nesprin-3存在相互作用。 结果:生物信息学分析结果表明,SPAG4L蛋白具有跨膜结构;亚细胞定位结果发现,SPAG4L蛋白定位于核膜和胞浆;免疫荧光、免疫共沉淀和双分子荧光互补实验结果表明,SPAG4L蛋白与Nesprin-3蛋白质相互作用,形成LINC(linkers of the nucleoskeleton to the cytoskeleton)复合物。 结论:SPAG4L与Nesprin-3 能够相互作用,形成LINC复合物,对了解SPAG4L蛋白在精子发生中的作用具有重要的意义。
付涛 , 苏丹华 , 刘原 , 刘卿 , 吴亮 , 陈盛霞 , 姜旭淦
2017(3):226-229.
摘要:摘要:目的:构建人降钙素原(procalcitonin,PCT)原核表达载体,获得高纯度PCT重组蛋白。 方法:根据NCBI上PCT基因序列设计引物,利用PCR技术扩增PCT基因,构建PCT/pET-22b(+)重组表达载体,转化至大肠埃希菌(E.coli)BL21中诱导表达;采用镍柱亲和层析法纯化重组蛋白,用western blot和胶体金法对其进行鉴定。 结果〖HTK〗〓琼脂糖凝胶电泳结果显示PCR扩增产物约为350 bp。同源性比对分析结果表明,PCT基因片段(348 bp)成功插入pTG19-T载体,未出现碱基突变。用BamHⅠ和HindⅢ对重组表达载体双酶切,得到约为350 bp和5 500 bp片段。SDS-PAGE电泳显示PCT重组蛋白以可溶性形式存在,Mr约14 000,经镍柱亲和层析法纯化后即可获得。western blot和PCT胶体金法结果呈阳性,显示融合蛋白含组氨酸标签(His-tag),成功表达出PCT重组蛋白。 结论:应用重组DNA技术成功构建PCT基因融合重组表达载体,通过蛋白质表达纯化技术获得PCT融合蛋白。
刘文娟 , 巩萌 , 崔宁轩 , 王颖 , 赵霄 , 余春红 , 易宗春
2017(3):230-233.
摘要:摘要:目的:探讨不同孔径微孔滤膜对不同直径大小的肿瘤细胞的滤过作用及其对过滤后细胞活性的影响。 方法:选择不同孔径(1、3、5、8、10 μm)的聚碳酸酯微孔滤膜分别过滤浓度相同但细胞直径不同的Jurkat、K562和A549细胞,测定细胞通过滤膜的滤过率;光学显微镜测量3种细胞(包括甲醛固定后的K562)的直径及其经不同孔径的滤膜过滤后的细胞直径;台盼蓝染色法检测经滤膜过滤后的K562细胞活性,对细胞进行再培养,并用生长曲线分析其细胞增殖能力。 结果:Jurkat、K562和A549细胞均不能通过1 μm孔径的滤膜,通过3、5、8、10 μm孔径滤膜的滤过率均依次升高。经3 μm孔径滤膜滤过的K562细胞存活率为92.0%,且滤过后的细胞再培养后的细胞增殖能力仍较强。经甲醛固定的K562细胞的滤过率明显降低,且细胞平均直径无明显变化。 结论:活细胞能穿过孔径小于其直径的滤膜;穿过滤膜的细胞仍保持活性增殖,但甲醛固定可明显减少细胞通过滤膜。
2017(3):234-238.
摘要:摘要:目的:评价肌钙蛋白联合和肽素对急性心肌梗死(acute myocardial infarction, AMI)早期诊断的临床价值。 方法:采用荟萃(meta)分析法,全面检索PubMed、CNKI、万方、维普等中英文数据库,收集建库至2016年5月的关于肌钙蛋白联合和肽素对AMI早期诊断的研究,用MetaDisc1.4软件进行分析。 结果:纳入19篇文献,共计11 176例研究对象。按随机效应模型计算(95%CI),肌钙蛋白单独检测及肌钙蛋白联合和肽素检测,对AMI早期诊断的敏感性、特异性、阳性似然比、阴性似然比、诊断比值比(DOR)、曲线下面积(AUCROC)分别为77%(75%~79%)、92%(91%~93%);0.85(0.85~0.86)、0.60(0.59~0.61);5.78(4.01~8.32)、2.25(1.98~2.55);0.22(0.18~0.28)、0.12(0.09~0.17);32.21(23.72~43.75)、20.23(14.33~28.55);0.911 8、0.788 8。 结论:肌钙蛋白联合和肽素具有更高的敏感性,可以减少漏诊率,但单独检测具有更高的特异性和诊断准确性。