摘要:非维生素K拮抗口服抗凝药(NOACs)是预防和治疗血栓性疾病的常用药物，包括达比加群酯、阿哌沙班、利伐沙班、艾多沙班等，这些药物代谢过程稳定，不易受环境因素干扰，药效可预期，因此不需常规监测。在某些特定情况时，如高龄、严重肝肾功能不全、营养状况不佳或胃肠道吸收不良、肥胖或体重过轻、联合用药、硬膜外间隙阻滞麻醉、紧急手术或溶栓治疗前停药不充分等，可能影响NOACs的药代动力学或出现药效学异常，因此需通过实验室检查来评估治疗的安全性和有效性。监测NOACs的主要试验包括：液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)、凝血酶原时间(PT)、活化的部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、稀释凝血酶时间(dTT)、抗活化因子Ⅹ活性试验(anti-FⅩa)、蝰蛇毒凝血时间(ECT)和稀释的蝰蛇毒时间(dRVVT)等。该文综述并评价NOACs实验室监测的临床应用进展。

摘要:目的 以组队检测模式调查当前在应对疫情防控中大量培训的新型冠状病毒核酸检测后备人员的技术能力，考查团队检测效率，为后续有重点地提高核酸检测人员技能水平、提升整体应对疫情的检测能力提供数据依据。方法 从全省各地市医疗机构、疾控中心和第三方实验室的PCR岗位证名单中按一定比例随机抽调450人，每15人1组，共组建30支组队，按照团队合作模式对每个人的实验技术、检测知识储备以及团队的多个方面进行竞技与考核。按新型冠状病毒核酸检测全过程，分为试剂配制考点、核酸提取A步骤和B步骤考点以及核酸扩增考点，按照每个考点的评分细则给每个选手的实验操作进行评分；设置个人面试，分为PCR结果解读和综合理论论述，对每位选手的理论知识进行考核。结果 2020年培训的新证人员各项成绩均低于2019年以前培训的老证人员，且内部差异明显；移液器吸样不准、出现加样错误和手套污染样本的失误率分别为30.30%、21.10%和17.20%，移液器走位不规范、加样超时和未确认加样的失误率分别为34.4%、22.5%和15.0%。组队最终检测结果的准确性与组队的技术成绩呈正相关。队伍前期组织过1～3 d集训的地市成绩显著高于没有组织过集训的地市。结论 对2020年新培训的新证人员要加强理论培训，尤其加强PCR结果解读的技术培训。提前开展核酸检测机动队的演习，磨合团队配合，落实技术和流程，确保在疫情出现最初就具备高效检测的能力。

摘要:目的 分析影响新型冠状病毒肺炎(COVID-19)患者核酸转阴时间的相关因素，探讨核酸转阴时间与血液淋巴细胞亚群的关系。方法 选取阜阳市第二人民医院收治的155例COVID-19患者作为研究对象，收集患者人口学资料、临床症状、治疗方案以及肺部CT影像资料，采用流式细胞仪检测血液CD4+、CD8+T淋巴细胞计数，计算核酸转阴时间，采用单因素和多因素Logistic回归分析的方法，分析影响核酸转阴时间的影响因素。采用Pearson相关性分析，探讨核酸转阴时间和淋巴细胞亚群的相关性。结果 平均核酸转阴时间为15.88 d(修约后取16 d)，分为核酸转阴时间≥16 d组(A组)和<16 d组(B组)，A组84人，B组71人。单因素分析显示，两组患者间性别、基础疾病合并率、武汉旅居史、发热持续时间、咳嗽持续时间、糖皮质激素、丙种球蛋白、抗病毒药物种类之间差异无统计学意义(P>0.05)，而年龄、临床分型、CD4+T细胞、CD8+T细胞、肺CT评分之间差异存在统计学意义(P<0.05)。多因素Logistic回归分析显示，年龄≥60岁、重型/危重型患者以及CD8+T细胞水平降低是影响核酸转阴的危险因素。COVID-19患者中位CD4+、CD8+T计数分别为428个/μL和299个/μL；核酸转阴时间与CD8+T淋巴细胞计数呈负相关性(r=-0.689，P=0.024)，与CD4+T淋巴细胞计数无相关性(r=-0.544，P=0.137)。ROC曲线分析结果显示，CD8+T细胞预测核酸转阴时间延长的曲线下面积(AUC)为0.714，95%可信区间(95%CI)为0.630～0.799，最佳临界值为236个/μL。结论 COVID-19患者CD8+T淋巴细胞降低，老年人群和重症患者以及CD8+T细胞水平显著下降可能影响新型冠状病毒核酸转阴时间，导致病程相对延长。

摘要:目的 评价同一厂家新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸检测扩增时间长的试剂(试剂A)与扩增时间短的试剂(试剂B)的临床性能，分析试剂更换的可行性。方法 用2019-nCoV阴性混合样本将商品化2019-nCoV RNA液体室内质控品(以ORF1ab浓度赋值17 300 copies/mL)梯度稀释成1 730、865、567.7、432.5、216.3、108.2 copies/mL 6个浓度，在连续3 d内每个浓度每天做7～8个复孔，共计23个复孔，进行磁珠法提取核酸和实时荧光RT-PCR扩增，以评价试剂A和B的分析灵敏度。用试剂A和B分别检测来自华中科技大学同济医学院附属协和医院2020年2月9日发热门诊的130例患者咽拭子样本核酸，进行临床检测性能评价，并将其中5例2019-nCoV强阳性核酸连续10倍梯度稀释作2种试剂的相对灵敏度评价。结果 试剂A和B检测1 730、865、567.7、432.5、216.3和108.2 copies/mL的质控品稀释液中ORF1ab基因的阳性率分别为100%和100%、95.65%和82.61%、95.65%和78.26%、91.30%和78.26%、65.22%和43.48%、34.78%和17.39%；试剂A和B的最低检测限分别为615.9(95%CI：446.0～1 098.5)copies/mL和1 249.1(95%CI：863.4～2 378.8)copies/mL。5例2019-nCoV强阳性的临床样本核酸在1∶10和1∶100稀释时，试剂A和B对ORF1ab和N基因检出率均为100%；而1∶1 000稀释时，对于ORF1ab和N基因，试剂A的检出率均为100%，试剂B的检出率分别为73.3%和80.0%。130例咽拭子样本中，试剂A 2019-nCoV RNA检测阳性率为43.85%，试剂B为 33.08%，差异有统计学意义(P<0.05)；2种试剂的检测结果一致性较好(kappa=0.775 3)，阳性符合率为75.44%(43/57)，阴性符合率为100%(73/73)，阳性预测值为100%(43/43)，阴性预测值为83.91%(73/87)，总符合率为89.23%(116/130)。结论 2种2019-nCoV核酸检测试剂的临床性能之间存在差异。为保证2019-nCoV核酸的检测质量，不宜将该厂家扩增时间长的试剂更换为扩增时间短的试剂。

摘要:Objective To establish and evaluate a multiplex PCR combined with capillary electrophoresis (mPCR-CE) for simultaneous detection of blaKPC, blaNDM, blaOXA-48, and blaVIM. Methods Specific primers were designed and multiplex PCR amplification was optimized. The products were determined by capillary electrophoresis. The isolates carrying blaKPC, blaNDM, blaOXA-48, and blaVIM as positive control and others carrying other β-lactamase genes as negative control were used to evaluate the specificity and sensitivity of mPCR-CE. A total of 68 clinical isolates were collected and detected by mPCR-CE, and then the results were confirmed by Sanger sequencing after PCR. Results Analysis of sensitivity and specificity showed that the detection limit of mPCR-CE was 1.5 × 10^2 CFU/mL for the isolates harboring blaKPC, blaNDM or blaVIM, and 1.5 × 10^3 CFU/mL for the isolates carrying blaOXA-48. There was no cross-reactions with other isolates carrying β-lactamase genes. Among 68 clinical isolates which detected by mPCR-CE, 37 carried blaKPC and 8 blaNDM. No blaOXA-48 and blaVIM were detected. The results were consistent with the sequencing results after PCR amplification. Conclusion mPCR-CE assay can be effectively used to detect the carbapenemase genes of clinical isolates.

摘要:目的 采用一种微孔滤膜双重过滤法富集纯化尿液病原菌,探讨其与UF1000i联合MALDI-TOF MS在快速检测尿液病原菌中的临床应用 方法 收集我院2020年5月～2020年8月门诊及住院疑似尿路感染患者的中段尿液标本1583份,采用血琼脂平板进行细菌定量培养和MALDI-TOF MS鉴定,同时应用微孔滤膜双重过滤法对UF1000i细菌计数≥100/ul尿液进行过滤,过滤后的细菌涂抹于靶板上行MALDI-TOF MS鉴定,与作为金标准的培养法鉴定结果进行比较。结果 1583份尿液标本中,定量培养菌落计数≥10⁴cfu/ml标本291份(18.4%)。UF1000i细菌计数≥100/ul标本381份(24.1%),经培养菌落计数≥10⁴cfu/ml标本为272份(17.2%),UF1000i漏检率为6.5%(19/291)。与培养法鉴定结果比较,双重过滤法对培养阴性标本鉴定准确率为100%(109/109),对培养阳性标本鉴定准确率为88.9%(242/272)；双重过滤法对单一菌生长标本鉴定准确率为92.1%(211/229),对二种菌生长标本优势菌鉴定准确率为72.1%(31/43)；双重过滤法对革兰阴性杆菌鉴定准确率为94.7%(177/187),对革兰阳性菌鉴定准确率为84.6%(33/39),对真菌鉴定准确率为33.3%(1/3)。尿液富集纯化时间为2～3min/标本。结论 微孔滤膜双重过滤法是一种快速有效的富集纯化尿液病原菌的方法,联合UF1000i及MALDI-TOF MS可更加快速准确检测尿液中病原菌,不仅能够满足临床诊疗需求,而且该方法简单、快速、准确、经济,可在临床推广应用。

摘要:目的 观察无精子症患者Y染色体序列标签位点-聚合酶链反应(STS-PCR)与二代测序(NGS)检测的差异。方法 对133例无精子症患者，采用STS-PCR检测Y染色体AZF微缺失的15个STS位点，包括AZF a区的sY84/sY86、AZF b区的sY124/sY127/sY128/sY133/sY134/sY143/sY1192、AZF c区的sY152/sY239/sY242/sY254/sY255、AZF b/c区的sY145，同时采用NGS检测Y染色体基因组拷贝数变异(CNVs)，并统计分析两种检测方法的差异。结果 133例无精子症患者中，Y染色体AZF微缺失异常17例(12.78%)，其中缺失14个STS 1例，占5.88%；缺失12个STS 3例，占17.65%；缺失11个STS 1例，占5.88%；缺失6个STS 1例，占5.88%；缺失5个STS 1例，占5.88%；缺失4个STS 2例，占11.76%；缺失2个STS 1例，占5.88%；缺失1个STS 7例，占41.18%。Y染色体CNVs异常12例(9.02%)，其中既重复又缺失3例，占25%；重复(dup)4例，占33.33%；缺失(del)5例，占41.67%。Y染色体AZF(15个STS)微缺失的结果与CNVs缺失结果相比，差异有统计学意义(P<0.05)，而Y染色体AZF(经典6个STS)微缺失的结果与CNVs缺失结果相比，差异无统计学意义(P=0.357)。结论 STS-PCR和NGS互有补充，前者不能检测出重复，后者可能漏检小片段缺失。在无精子症遗传因素的实验室检查中，可以考虑采用NGS作为筛选，而采用STS-PCR作为验证。

摘要:目的 构建一种基于深度学习的革兰染色图像自动分类模型EKNet，实现对泌尿系统感染常见的大肠埃希菌(Eco)和肺炎克雷伯菌(Kpn)的快速诊断。方法 将预处理后的细菌图像输入残差网络模型，计算交叉熵损失，通过反向传播算法进行参数优化，获得预训练模型EKNet。共采集368例Eco和292例Kpn显微图像，其中272例Eco和214例Kpn进行训练，40例Eco和30例Kpn进行验证，余下104例图像进行测试。以ResNet50模型和AlexNet模型作为对照，评估EKNet模型的实用性。结果 EKNet模型测试一个样本的平均用时是0.165 s，优于ResNet50模型的0.38 s和AlexNet模型的0.66 s；图像识别准确率达98.8%，优于ResNet50模型的96.4%和AlexNet模型的78.6%。EKNet模型对104例临床测试的显微图像输出结果与尿培养的结果完全吻合，正确率为100%。结论 成功构建Eco和Kpn的图像诊断模型EKNet，为临床泌尿系统感染的快速诊断提供参考。

摘要:目的 检测系统性硬化症患者血浆microRNA(miRNA)的相对表达量，分析其与患者临床指标的相关性。方法 选取49例系统性硬化症患者和同期体检健康者20例，采集静脉血，用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测血浆中7种miRNA(miR-140-5p、miR-21、miR-142-3p、miR-29a、miR-92a、miR-151-5p、let-7g)的水平，并根据是否合并高血压、肺动脉高压、间质性肺病、胃肠道累及、雷诺现象、肾脏累及进行分层分析，统计miRNA表达水平与淋巴细胞计数、白细胞计数、肌酐、尿素氮、24 h尿蛋白、总蛋白、补体C3、补体C4、免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白E(IgE)、免疫球蛋白M(IgM)的相关性。结果 系统性硬化症患者血浆miR-21、miR-142-3p、miR-29a、miR-92a、miR-151-5p、let-7g的水平较健康人对照明显下降(t=2.81、4.78、3.07、6.07、4.90、6.64，P均<0.05)。合并肺动脉高压的患者miRNA-21和miRNA-142-3p水平较无肺动脉高压患者明显升高(t=2.27、2.03，P均<0.05)，miRNA-140-5p与患者IgG正相关(r=0.32，P=0.02), miRNA-21与患者IgA(r=0.32，P=0.03)、IgG(r=0.33，P=0.02)正相关，miR-92a与患者淋巴细胞计数(r=-0.34，P=0.02)、白细胞计数(r=-0.31，P=0.03)、补体C3(r=-0.30，P=0.04)负相关，miR-151-5p与患者IgG正相关(r=0.32，P=0.03)，let-7g与患者IgG(r=0.32，P=0.03)、IgE(r=0.30，P=0.04)正相关。结论 系统性硬化症患者血浆miRNA存在明显异常，与患者脏器累及、淋巴细胞计数、白细胞计数、补体C3、IgA、IgG、IgE相关，可能为系统性硬化症生物学标志物之一。

摘要:目的 了解产GES-1型碳青霉烯酶铜绿假单胞菌的分子流行特征。方法 采用Illumina HiSeq X10测序平台对1株产GES-1型碳青霉烯酶铜绿假单胞菌进行全基因组测序，通过Kleborate和ResFinder分析菌株的多位点序例分型(MLST)、毒力基因和抗菌药物耐药基因，并分析blaGES-1基因的周围环境。结果 经比对，本菌为ST235型，血清分型为O11型，共携带12个抗菌药物耐药基因，分别为aac(6′)-Ⅰb3、aadA10、aph(3′)-Ⅱb、aph(3′)-XV、blaGES-1、blaOXA-50、blaPAO、crpP、sul1、tet(G)、fosA、catB7；blaGES-1位于含有3 150 bp的NODE_219片段中，该片段与GenBank中的KY860573菌株的72068—75217序列99.94%一致。其基因环境为位于上游的整合子1(intl1)，β-内酰胺类耐药基因blaGES-1，氨基糖苷类/氟喹诺酮类耐药基因aac(6′)-Ⅰb3，氨基糖苷类耐药基因aph(3′)-XV及位于下游的插入序列ISPa21e。该菌包含有357个毒力基因，为exoU+/exoS-基因型。结论 本菌为全球流行的高风险克隆ST235，exoU+/exoS-基因型。全基因组测序分析提供了blaGES-1基因环境、基因分型、耐药基因、毒力基因等多种信息。

摘要:目的 探讨宫颈癌患者宫颈上皮细胞中硫氧还蛋白2(thioredoxin,Trx2)相对表达水平及临床意义。方法 选取2018年8月至2019年12月在武汉市妇幼保健院经病理学确诊的宫颈癌患者32例、子宫颈上皮瘤样变患者39例及健康人对照者30例的宫颈刷片组织，分别采用实时定量荧光PCR(qRT-PCR)法检测宫颈上皮细胞标本中Trx2的表达状况，并分析宫颈癌患者不同临床病例特征下Trx2表达水平的差异。结果 宫颈癌组Trx2水平(251.62±43.77)比子宫颈上皮瘤样变组(443.18±57.53)和健康人对照组(668.44±50.61)显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)。Trx2表达水平与宫颈癌患者年龄、组织学类型及肿瘤大小无关(P>0.05)，而与肿瘤分化程度、是否存在淋巴结转移及FIGO分期密切相关(P<0.05)。结论 宫颈癌患者宫颈上皮细胞中Trx2表达显著降低，与宫颈癌进展、分化程度有关，Trx2可能在宫颈癌进展中发挥重要作用。

摘要:目的 探讨粪钙卫蛋白(FC)在克罗恩病(CD)病情评估中的价值。方法 选取南京医科大学第一附属医院确诊为CD的患者128例。用酶联免疫法检测FC。回顾性分析不同疾病炎症程度、不同病变部位、不同疾病活动程度患者间FC水平差异，以及FC水平与WBC计数、血红蛋白(Hb)、血小板计数(PLT)、C反应蛋白(CRP)、血沉(ESR)、清蛋白(Alb)的关系。结果 重度炎症组、中度炎症组FC水平均高于轻度炎症组，差异有统计学意义(Z=-3.364、-2.441，P均<0.05)。回结肠病变组FC水平显著高于回肠病变组，差异有统计学意义(Z=-3.261，P=0.001)。中度活动期、轻度活动期的FC水平均高于缓解期，中度活动期FC水平高于轻度活动期，差异均有统计学意义(P<0.05)。FC水平与CRP(r=0.481)、ESR(r=0.428)、PLT(r=0.480)呈正相关，与Alb(r=-0.485)、Hb(r=-0.389)呈负相关。结论 FC可作为CD病程中病情评估的无创标志物。

摘要:细胞因子是调控免疫应答及介导炎症反应的关键分子，在防御病原体感染和自身免疫性疾病发生机制中起重要作用。机体内细胞因子免疫耐受不完全，可产生相应的抗细胞因子自身抗体(anti-cytokine autoantibodies，ACAA)。ACAA通过阻断靶细胞因子的生物学功能诱导获得性免疫缺陷，被认为是“原发性免疫缺陷的自身免疫表型”。研究发现ACAA的存在不仅引发特殊感染表型，还与多种自身免疫性疾病的发展及预后相关。研究发现中和性I型干扰素自身抗体可能是导致危重症新型冠状病毒肺炎(COVID-19)的诱因。该文将对ACAA相关的特殊感染表型及自身免疫性疾病中的临床意义进行简要综述。

摘要:人体呼出气中包含的数千种挥发性有机化合物(VOC)，是人体代谢和外源性化合物暴露过程的产物，外源性VOC可表征外界因素对人体健康的影响；人体代谢产生的内源性VOC是呼吸代谢组学的媒介，可作为生物标志物用于人体健康状况评估以及疾病诊断，在临床应用中具有极大的潜力；此外，很多人也开展了使用训练有素的嗅探犬进行疾病筛查的研究。在临床和实验室针对人体呼出气的研究中，主要通过无创且快速的手段进行气味样本采集，并采用基于气相色谱、质谱、激光光谱以及气体传感器等的方法进行检测分析。该文主要对人体呼出气的采集、检测分析技术、疾病生物标志物的发现以及临床应用等方面的研究进展进行综述，并对人体呼出气的分析研究与应用进行展望。

摘要:生物膜是细菌为适应外界环境而形成的具有高度系统化的活性群体，其与浮游菌由于存在结构的差异性，以致细菌耐药性、毒力和生理特性存在不同。近年来研究表明，亚抑菌浓度抗菌药物可以通过多因素的调控来影响细菌生物膜的形成。该文对亚抑菌浓度抗菌药物的来源及其对细菌生物膜形成的影响进行阐述，以期为临床有效治疗提供理论依据。

摘要:目的 描述临床OXA-232肺炎克雷伯菌(OXA-232-producing Klebsiella pneumoniae，OXA-232Kp)的流行病学特征。方法 收集2018年9月—2019年9月江苏5家医院临床分离的碳青霉烯耐药肺炎克雷伯菌(carbapenem-resistant Klebsiella pneumoniae, CRKP)，采用微量肉汤稀释法和Phoenix-M50自动微生物系统进行药敏分析；PCR结合测序检测blaOXA-232基因；脉冲场凝胶电泳(PFGE)分析菌株同源性；质粒测序分析携带blaOXA-232基因的质粒周围环境。结果 筛选出3株OXA-232Kp ST15型， PFGE分析呈克隆性传播，携带6 141 bp ColKP3型质粒，与中国东部研究发现携带blaOXA-232基因的质粒高度同源。结论 本文首次调查OXA-232Kp ST15在江苏地区的流行病学特征。携带blaOXA-232的质粒具有高度的同源性，表明该6 141 bp ColE型质粒对OXA-232在江苏地区的流行具有重要作用。

摘要:目的 探讨月均值监控精液分析中主要参数在男科实验室室内质量控制中的作用。方法 收集、统计2014年11月—2019年9月在广东省计划生育科学技术研究所男科门诊及住院治疗的男性不育症患者精液分析结果共40 033份，每月分析精液量、精子浓度、pH值、前向运动精子百分率、正常形态精子百分率，计算各参数每月的均值和标准差，分别以2个和3个标准差在均值两端设置警戒限和处置限，用Microsoft Office Excel软件制成Xbar图。按照质控图的基本控制规则，对各项指标的月均值进行监控，当发现月均值超出警戒限或处置限时，分析其导致的原因和变化的趋势。结果 从2016年6月开始，精液量月均值升高(持续性超出警戒上限)，调查发现是源于精液标本采集方法的修改。2018年5月，精子浓度大幅超出处置上限，调查发现是源于出现多例高浓度精子症的特殊情况；每年的7、8月精子浓度的月均值均低于处置下限，分析原因考虑为与季节温度有关。从2018年1月开始，前向运动精子百分率均值升高(持续性超出警戒上限)，调查发现是源于添加了实验恒温设备。2017年9月前后的pH月均值差异较大，调查发现是源于更换了pH试纸(量程不同)。从2017年6月开始，正常形态精子百分率连续17个点位于均值下方，调查发现是源于精子染色的方法学改变后没有及时修正评判标准。结论 月均值应用于监控精液分析结果，是一个简便而实用的质量保证方法，在男科实验室质量控制体系中起到很好的误差监控作用，能较好地回顾性观测结果的趋势，其偏离主要反映不同患者特性的改变或技术因素的变化。

摘要: