摘要:摘要:目的开发 并评估一种基于线粒体分离纯化技术的线粒体DNA( mtDNA)深度测序方法。方法探索从细胞中分离mtDNA的最适条件;基于该方法对外周血单个核细胞( PBMC)样本进行mtDNA深度测序，通过测序片段( reads)中mtDNAreads占比评估测序文库中mtDNA的纯度,通过Sanger测序验证该方法所检出的mtDNA变异的准确性。结果采用含低浓度NP40和不含Tween-20的裂解液裂解细胞获得的mtDNA纯度高,几乎不含细胞核基因组。在6例PBMC样本中应用该方法检测结果显示，mtDNA reads 占比为87.8%-92.8% ,且检测出多个mtDNA变异。对其中1个异质性变异和3个同质性变异进行Sanger测序验证,二者结果相一致。结论本研究开发的基 于线粒体分离纯化技术的mtDNA 深度测序方法可应用于PBMC样本,能准确且灵敏地检出线粒体基因组的同质性和异质性变异。

摘要:摘要:目的与基于 长片段PCR( lrPCR)的传统mtDNA测序方法比较，评估本课题组前期研究开发的一种新型非PCR依赖的mtDNA深度测序方法的可靠性。方法同时采用新方法和传统方法对 10例产前筛查孕妇外周血样本进行平行试验,对比两种方法所得结果,结合人群数据库( MitoMAP和mtDB)信息,评估新方法的准确性。结果10 例样本中共检出380个变异,其中351个变异同时被两种方法检出,29个变异仅被单一方法检出。对29个不一致变异中出现于2个或2个以上样本的8个变异进一步分析发现,2个仅被新方法重复检出的变异在人群数据库中存在记录;而6个仅传统方法重复检出的变异在人群数据库中未见记录。结论与传统基 于lrPCR的mtDNA测序方法相比,新方法针对同质性变异及高异质度变异的检测能力相当,而针对低异质度变异检测时具有更高的准确性。

摘要:摘要:目的构建子宫内膜癌PTEN基因968delA突变检测技术平台,为临床分析PTEN基因968delA突变与子宫内膜癌的相关性提供技术支持。方法设计 PTEN基因968delA位点的特异性硫化修饰引物,以本实验室前期构建的包含PTEN基因968delA位点的突变型质粒和野生型质粒为模板，进行高保真聚合酶介导的双向引物延伸反应,采用正交设计进行PCR条件优化,再将其优化后采用突变敏感性分子开关技术检测从南华大学附属第一医院收集的62例临床患者子宫内膜组织样本PTEN基因968delA位点突变。结果突变敏感性分子开关技 术检测PTEN基因968delA位点最佳PCR反应条件为:30个循环、模板DNA( 10 ng/μL)0.3 μL、引物( 10 pμmol/L)0.5 μL、退火温度61 C,灵敏度达10-3 ng/μL。62例子宫内膜癌组织与21例正常子宫内膜组织标本均未发现PTEN基因968delA突变。结论成功构建了 子宫内膜癌PTEN基因968delA突变检测技术平台,为该技术在PTEN基因968delA的突变筛查中的应用提供了依据。

摘要:摘要:目的对一角膜营养不良家 系的致病基因进行检测,明确该家系角膜营养不良的致病基因突变位点。方法采集先证者及其家系成员外周血标本，提取基因组DNA,采用全外显子组测序筛查先证者致病基因及突变位点，并通过Sanger测序对 先证者及其家系成员DNA样本进行验证。结果全外显 子测序结果显示，先证者5号染色体上的转化生长因子β诱导基因(TGFBI)4号外显子发生c.370 C>T(p.R124C)杂合突变,8号外显子发生c.1007 A>T(p.E336V)杂合突变。Sanger 测序验证 发现患者父亲及家系其他患者TGFBI基因也发生c.370 C>T(p.R124C)杂合突变,患者母亲及家系其他正常成员未见TGFBI基因发生突变。TGFBI基因c.370 C>T(p.R124C)突变与疾病表型共分离。结论TGFBI 基因e.370 C>T(p.R124C)杂合突变 是导致该家系角膜营养不良的致病原因。

摘要:摘要:目的探讨血管 紧张素1型受体[ AGTRI( A1166C)]基因多态性对原发性高血压(EH)发病的影响及其与患者临床检验指标水平的关联。方法选取2022 年1月至12月徐州市第一人民医院确诊的240例EH患者(EH组)作为研究对象，另选取同期体检健康者180例作为健康人对照组,分析高血压药物相关基因多态性的分布特征;根据AGTRI(A1166C)基因多态性检测结果,将EH患者分为AA组、AC/CC组,分析AGTRI( A1166C)基因多态性对2组EH患者肾素活性(PRA)、醛固酮(ALD)、脂蛋白a[Ip(a)]、 血管紧张素2(AT2)、促甲状腺激素(TSH)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)、游离甲状腺素(FT4)、总胆固醇(TC)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶( ALT)、总胆红素(T-Bil)、直接胆红素( D-Bil)、总胆汁酸(TBA)、 尿素(Ure)、三酰甘油(TG)、高密度脂蛋白胆固醇( HDL-C)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、载脂蛋白A1(apo A1)、载脂蛋白B(apo B)、载脂蛋白E(apo E)、碱性磷酸酶( ALP)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、尿酸(UA)、血葡萄糖(Glu)、游离脂肪酸( NEFA)、小而密低密度脂蛋白胆固醇( sdLDL-C).腺苷脱氨酶( ADA)、x-L-岩藻糖苷酶(AFU)、甘胆酸(CG)、肌酐(Cr)、胱抑素C(CysC)、果糖胺(FMN)、 缺血修饰清蛋白(IMA)、高半胱氨酸( Hey)等临床检验指标的影响。结果AGTRI( A1166C)基因型及基因位点频率分布在EH组和健康人对照组间的差异具有统计学意义(x2 =24.815,P<0.05),具有AC/CC基因型的个体更易患EH;AC/CC组患者PRA、ALD、Ip(a)项目均显著高于AA组[ PRA:Z =2.216, P= 0.029;ALD:t= 2.406, P= 0.017;Lp(a):t=2.406,P=0.021];其余检验项目如AT2、TSH、FT3、 FT4、TC、AST、ALT、T-Bil、D-Bil、TBA、Ure、TG、HDL-C、LDL-C、apo A1、apo B、apo E、ALP、GGT、UA、Glu、NEFA、sdLDL-C、ADA、AFU、CG、Cr .CysC、FMN、IMA、Hey等在2组间的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论AGTRI( A1166C)基因型和等位基因分布在EH患者和健康人群中存在显著差异,AC/CC变异更易罹患高血压;AC/CC基因型变异可能上调EH患者PRA、ALD、Ip(a)水平。

摘要:摘要:目的对1例血型血清学检测为RHD变异型的样本进行基因分型,并进行家系调查分析。方法运用血型血清学检测方法对先证者及其家系样本进行RHD确认及RH血型抗原表位检测，用序列特异性引物PCR( sequence specifie primer PCR,PCR-SSP)法分析RHD基因外显子的表达,运用Sanger和SMRT ( single molecule real-timesequencing)测序法 对先证者及其家系样本进行RHD基因的1~10外显子测序分析。通过AlphaFold模拟构建蛋白质三级结构,将突变前后的蛋白质结构进行叠合以观察结构内分子间相互作用力的改变。结果先证者为 RHD弱表型,其他抗原为Ccee, 直接抗人球蛋白试验抗体筛查、抗体鉴定试验均为阴性，PCR-SSP 初步分型为RHD阳性。其父母血型血清学及PCR-SSP结果均为RHD阳性。SMRT 测序结果显示先证者母亲为RHD*/RHD杂合子。Sanger 测序结果显示，先证者父亲携带弱D型54等位基因。AlphaFold 建模预测揭示,p.Serl22Leu突变不能与146位GLU形成氢键相互作用。结论该样本为弱 D型54,p.Ser122Leu突变导致氨基酸内部分子间作用力发生改变,从而引起突变后蛋白质结构和功能的部分改变。

摘要:摘要:目的探讨 高脂血症患者SLCOIBI和APOE基因多态性,分析二者与患者血脂水平的相关性。方法选取郑 州颐和医院2019年1月至2021年12月收治的154例脂代谢异常患者为研究对象,同期选择体检健康者113例作为健康人对照组,采用PCR-荧光探针技术检测SLCOIBI和APOE的基因分型,分析基因多态性的分布特点,探讨高脂血症患者SLCOIBI和APOE基因与血脂水平的相关性。结果高 脂血症患者SLCOIBI基因以正常代谢性基因表型( * 1a/* 1a、* 1a/* lb和*1b/ * 1b)为主,占所有基因型的79.9%,其中各单体基因型频率分布以1b型占比最高,为64.4% ,疾病组和健康人对照组基因表型频率组间比较差异均无统计学意义(P>0.05)。高脂血症患者APOE基因表型以E3组(E3/E3和E2/E4)为主，占比66.9% ,APOE各等位基因频率分布以E3表型占比最高,为76.7%;疾病组E3基因表型明显低于健康人对照组,E4基因表型明显高于健康人对照组,差异均具有统计学意义(P<0.05)。高脂血症患者SLCOIBI各基因表型的三酰甘油(TG)、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)和高密度脂蛋白胆固醇( HDL-C)水平比较差异均无统计学意义(P>0.05);APOE基因E4表型组的TC水平显著高于E2组和E3组,差异其有统计学意义(P<0.05);基因表型E2、E3和E4组的TG、LDL-C和HDL-C水平比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论脂代谢异常患 者SLCOIBI和APOE基因多态性分布不均匀，血脂异常可能与SLCOIBI和APOE基因多态性有关。对于脂代谢异常患者,在其使用他汀类药物前进行SLCOIBI及APOE基因型检测尤为重要。

摘要:摘要:目的探究 微小RNA-221-3p( miR-221-3p)、胰岛素样生长因子-1(IGF-1)在妊娠期糖尿病(GDM)患者血清中的表达水平及其与妊娠结局的关系。方法收集 2020年5月至2022年5月于濮阳市妇幼保健院足月分娩的血糖控制良好的80例GDM患者为GDM1组,血糖控制不良的80例GDM患者为GDM2组,另选取同期足月分娩的糖代谢正常的80例健康孕妇为健康人对照组。qRT-PCR 和ELISA法检测各组血清miR-221-3p、IGF-1 的表达水平; Pearson法分析GDM患者血清miR-221-3p、IGF-1水平的相关性以及二者与稳态模型胰岛素抵抗指数( HOMA-IR)、空腹胰岛素(FINS)、空腹血糖( FBG)的相关性;进一步分析GDM患者血清miR-221-3p 、IGF-1表达水平与妊娠结局的关系。结果GDM1 组、GDM2组患者血清IGF-1 、FBG、FINS、 HOMA-IR 水平及产后出血、羊水过多、胎膜早破、巨大儿、胎儿窘迫发生率显著高于健康人对照组(P<0.05),而血清miR-221-3p的表达水平低于健康人对照组(P<0.05) ;且GDM2组患者除血清miR-221-3p水平低于GDM1组(P<0.05)外,其余上述指标高于GDM1组。GDM1组和GDM2组患者血清miR-221-3p水平与IGF-1 呈负相关(P<0.001),血清FBG、FINS、HOMA-IR与miR-221-3p水平均呈负相关(P均<0.001),而与IGF-1水平呈正相关(P均<0.001)。与未发生产后出血、羊水过多、胎膜早破、巨大儿、胎儿窘迫的GDM患者相比,发生以上不良妊娠结局的GDM患者血清miR-221-3p的表达水平降低(P<0.001),而IGF-1的表达水平升高(P<0.001)。结论GDM 患者血清miR-221-3p水平较低,IGF-1水平升高,且与不良妊娠结局密切相关。

摘要:摘要:目的探讨食管 癌患者血清中环状RNA eircAGFG1的表达水平,分析其与患者预后的相关性。方法选取2017年1月至2019年2月在梧州市红十字会医院治疗的100例食管癌患者作为研究对象,以同期体检健康者40例作为健康人对照组，收集各组受试者的临床病理资料,对食管癌患者随访3年,并进行生存分析。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测食管癌患者和健康人对照组血清circAGFG1的表达水平,电化学发光法检测两组血清eircAGFG1、甲胎蛋白(AFP)、癌胚抗原(CEA)、糖类抗原19-9(CA19-9). 鳞状细胞癌抗原(SCC)、细胞角蛋白19片段( CYFRA21-1)的表达水平;采用Kaplan-Meier法分析血清eircAGFG1水平与食管癌患者预后的关系,并采用多因素Cox回归分析不同生存期食管癌患者预后的影响因素。结果食管癌患者血清eircAGFG1、AFP、CEA、CA19-9、SCC、CYFRA21-1的表达水平均显著高于健康人对照组( P<0.05);生存组患者血清CEA、SCC、CYFRA21-1、circAGFG1 的表达水平显著低于死亡组(P<0.05)。血清circAGFG1低表达食管癌患者的3年生存率显著高于高表达患者(79.41% vs 25.00% ,x=7.506,P<0.05)。TNM分期、CEA、CYFRA21-1和eircAGFG1是食管癌患者预后影响因素(P<0.05)。结论食管 癌患者血清eireAGFG1水平上调,其水平变化对患者预后评估具有重要意义。

摘要:摘要:目的探讨乳酸脱 氢酶(LDH)、金属蛋白酶组织抑制剂1(TIMP1)、细胞因子B淋巴细胞趋化因子(BLC)、嗜酸性粒细胞趋化因子2( Eotaxin2)对费城染色体阴性(Ph- )骨髓增殖性肿瘤( MPN)患者骨髓纤维化程度的预测效能。方法选取2017年7月至2018年7月经复旦大学附属中山医院明确诊断为Ph~ MPN患者40例,其中纤维化前/早期患者24例、明显纤维化期患者16例，选取同期体检健康者20例作为健康人对照组,采用ELISA法检测各组血清TIMP1、BLC、Eotaxin2 的表达水平,速率法检测乳酸脱氫酶(LDH)的表达水平,电阻抗法检测红细胞(RBC)、血小板计数(PLT),光电比色法检测血红蛋白(Hb)的表达;采用Mann-WhitneyU检验及Studentt检验比较各指标在不同分组间的差异,Spearman秩相关检验分析其与骨髓纤维化(MF)分级的关系;采用ROC曲线评估LDH、TIMP1、BLC、Eotaxin2 单独及LDH、TIMP1二者联合对骨髓纤维化程度的预测效能。结果MPN组患者血清LDH、TIMP1、BLC、Eotaxin2水平及PLT显著高于健康人对照组(P<0.05);明显纤维化期组血清LDH、TIMP1水平与纤维化前/早期组比较显著升高( P<0.05);MPN患者血清LDH与RBC(r=-0.353 6)、Hb(r=-0.505 7)呈负相关;血清LDH(r=0.588 6)、TIMP1(r=0.4824)、BLC(r=0.3158)与 MF分级呈正相关( P<0.05);血清LDH、TIMP1单独预测MPN患者骨髓纤维化程度的ROC曲线下面积( AUCROC)分别为0.828( 95% CI:0.700~ 0.956,P=0.000 5)、0.831( 95%CI:0.705~ 0.956,P=0.000 5),显著低于LDH、TIMP1联合预测的0.919( 95%CI:0.832~1.000,P<0.0001)。结论TIMP1 与LDH联合检测可预测MPN患者骨髓纤维化程度,有助于监测、随访骨髓纤维化的进展,辅助判断病情。

摘要:摘要:目的为 狼疮性肾炎( lupus nephritis, LN)患者的诊疗提供非创伤性的生物学标志物。方法收集 30例狼疮性肾炎LN患者和20例体检健康者血清和尿液标本;ELISA法检测血清和尿液中集落刺激因子-1(CSF-1)浓度,并计算尿液中CSF-1与 肌酐比值( CSF-1/Gr) ;ELSA法检测血清中抗dsDNA的表达水平;生化分析仪检测血清Cr、补体C3和尿蛋白的表达水平;按照LN患者病理分型,比较I和IV型LN患者血清CSF-1及尿液中CSF-1/Cr的水平;动态监测并比较LN患者治疗0、1和3 个月时上述指标的变化情况。结果LN 患者血清CSF-1水平显著高于体检健康者(98.41+4.12 pg/mL vs 10. 10+0.31 pg/mL,P<0.05);尿CSF-1/Cr亦显著高于体检健康者(2.75+0.13 pg/mg.Cr vs 0.89+0.04 pg/ mg.Cr ,P<0.05);与I型IN患者相比，II型或IV型LN患者血清CSF-1水平及尿CSF-1/Gr均显著升高(P<0.05),且IV型高于型LN患者(P<0.05);随着LN疾病缓解,患者常规实验室检查指标改善(抗dsDNA和24 h尿蛋白检测指标显著降低,补体C3水平明显增加),而血清CSF-1水平及尿液 CSF-1/Cr均明显降低。结论血清 CSF-1水平及尿液CSF-1/Cr对LN疾病活动度和疗效判断具有一定的指导作用。

摘要:摘要:近年来,生殖泌尿系统肿瘤的发病率与死亡率逐年上升,临床上迫切需要新的生物学标志物以进行早期的诊断和治疗。目前N-甲基腺苷(m°A)修饰受到基础医学和临床研究者的高度关注,它能够加快mRNA在细胞中的运转和出核速度。许多 生殖泌尿系统疾病的发生、发展都受m°A的修饰调控。m°A修饰不仅作用于RNA,也调控非编码RNA( non-coding RNA,ncRNA)。该文就m°A修饰调控ncRNA作用以及在生殖泌尿系统肿瘤中的研究进展作一综述。

摘要:摘要:肾细胞癌(renalcellcarcinoma,RCC)是常见的泌尿系统恶性肿瘤,早期症状隐匿，缺乏特异性,诊断困难,导致患者预后不佳。细胞外囊泡(extracellularvesicles,EVs)是由细胞主动释放的脂质膜结构囊泡,在RCC细胞表型及肿瘤微环境(tumormicroenvironment, TME)的调节中发挥重要作用。该文就EVs与RCC研究的进展作一综述,探讨其作为RCC诊断、伴随诊断、预后判断的新型液体活检分子标志物的临床价值,并简要介绍EVs应用于RCC诊疗的新技术现况。

摘要:摘要:免疫疗法正在给肿瘤治疗带来巨大的变化。然而,从免疫治疗中获益的患者只占小部分,为了挑选出对肿瘤免疫治疗敏感的患者,迫切需要特定的生物学标志物。目前临床上多采用程序性死亡配体1( programmed cell death 1 ligand 1, PD-L1)、肿瘤突变负荷(tumor mutational burden , TMB)和微卫星不稳定性( microsatellite instability , MSI)等几种预测生物学标志物,但对于大多数恶性肿瘤患者来说,它们并不是充分的生物学标志物。该综述介绍了一种起源于病毒致癌蛋白、体细胞突变或基因重排的新生抗原(neoantigen),总结了新生抗原的特点及检测技术,并讨论了新生抗原在免疫治疗中的潜力。

摘要:摘要:快速、灵敏、特异的检测方法对于提高肿瘤患者的生存率并改善预后至关重要。除了在基因编辑领域的贡献,近年来成簇规律间隔短回文重复序列(CRISPR)/CRISPR相关蛋白(Cas)系统以其特有的靶标核酸识别切割能力和反式切割活性为特 点,已成为新一代核酸检测工具被广泛应用于病原体、肿瘤和转基因等检测领域。基于此,该文对CRISPR/Cas12系统原理及其在不同肿瘤标志物中的检测应用进展作一综述,并对其应用前景进行展望，以期为CRISPR/Cas系统更好地应用于肿瘤筛 查和诊断提供参考及借鉴。

摘要:摘要:目的探讨使用肝癌血清标志物构建的3种机器学习(ML)模型对原发性肝癌的诊断价值,选择最优诊断模型以提高肝癌标志物的临床应用价值。方法回顾性分析2021年9月至2022年6月于山西医科大学第一医院住院的273例肝病患者的临床资料,其中原发性肝癌患者83例,慢性肝病及肝硬化患者190例,另外纳入25例体检健康者。收集各研究对象的临床资料以构建人工神经网络( ANN)、决策树(DT) JLogistic 回归(LR)模型。绘制ROC曲线并计算ROC曲线下面积( AUCROC),评估并比较3种模型的预测价值。结果ANN 模型的敏感性为86.7% ,显著高于LR模型(85.5%)、并联检测模型( 80.7%)、DT模型(63.9%)和串联检测模型(39.8%);各诊断模型的AUCROC分别为:ANN(0.908)、LR(0.903)、DT(0.827)、 串联检测(0.678)、并联检测(0.662)。结论机器学习模型能够提高血清标志物对肝癌的诊断价值,ANN模型和LR模型对肝癌的诊断价值相近,优于DT模型。

摘要:摘要:目的探讨脂 多糖(LPS)通过促进成纤维细胞生长因子受体1(FGFR1)磷酸化的方式诱导肺上皮细胞炎症反应及凋亡。方法培养肺上皮Beas-2B细胞并进行以下分组处理,以不含药物的培养基处理作为对照组,用5 mg/L LPS刺激作为LPS组,另加入不同浓度FGFR1选择性抑制剂AZD4547(2.5 5.0、10.0 μmol/L)作为AZD4547 组。采用CCK8法检测各组细胞的增殖活力,Tunel法检测细胞凋亡率，ELISA法检测细胞培养基中TNF-c、IL_1βJL-6的含量,Westernblot检测各组细胞总蛋白中磷酸化成纤维细胞生长因子受体1(p-FGFR1)、B淋巴细胞瘤-2基因( Bcl-2)蛋白、Bel-2相关X蛋白( Bax)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶- 3( cleaved caspase-3)以及核蛋白中p65核因子-kB(NF-kB)的表达水平。结果LPS 组Beas-2B细胞的增殖活力及Bel-2 水平均显著低于对照组(t分别为11.421 、17.784,P<0.05),而Beas-2B细胞的细胞凋亡率、p-FGFR1、Bax、cleaved caspase-3 、p65 NF-KB水平及培养基中TNF-ax、IL-1β、IL-6 含量均高于对照组(t分别为9.126、11.329、12.684、13.147、15.027 、11.621 8.925 .9.726, P<0.05);2.5、5.0、10.0 μmol/L浓度AZD4547组Beas-2B细胞的增殖活力及Bcl-2水平均显著高于LPS组(F分别为45.012 .72.286, P<0.05),而细胞凋亡率、p-FGFR1、Bax、cleaved caspase-3、p65 NF-KB水平及培养基中TNF-a JIL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组(F分别为43.527, 94.166, 113.028, 102.515, 41.091, 51.301, 30.280, P<0.05),且AZD4547浓度越高,上述变化趋势越显著。结论LPS 诱导肺上皮细胞炎症反应及凋亡激活的作用可能与促进FGFR1磷酸化有关。